【摘 要】
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目的本研究观察胚龄(embryonic,E)18天(day,d)以及生后日龄(postnatal,P)为1、7、14、21、28 d的小鼠海马中自噬相关蛋白丝氨酸/苏氨酸激酶AKT、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(marnmalian target of rapamycin,mTOR)和微管相关蛋白1轻链3A(microtubule-associated protein 1 light chain 3 A
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目的本研究观察胚龄(embryonic,E)18天(day,d)以及生后日龄(postnatal,P)为1、7、14、21、28 d的小鼠海马中自噬相关蛋白丝氨酸/苏氨酸激酶AKT、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(marnmalian target of rapamycin,mTOR)和微管相关蛋白1轻链3A(microtubule-associated protein 1 light chain 3 A,LC3A)的表达,从而为深入研究自噬在海马发育中的作用提供基础的实验依据。方法昆明小白鼠按雌、雄比例为1:2同窝饲养,雌鼠阴道栓脱落当天为E0 d,仔鼠出生当天为P0 d。取E18 d的胎鼠、P1 d、P7 d、P14 d、P21 d和P28 d的仔鼠海马组织。利用HE染色和4’,6-二脒基-2-苯基吲哚(4’,6-diamidino-2-phenylindole,DAPI)染色观察海马形态学变化,并且对齿状回(DG)颗粒细胞层和阿蒙角(Ammon’s horn,CA)锥体细胞层进行细胞计数。利用免疫组织化学技术、免疫印迹技术结合图像分析技术检测各个时间点的小鼠海马中AKT、mTOR和LC3A的表达变化,进行系统的定性和定量分析。结果HE染色和DAPI染色发现,E18 d~P21 d,海马DG区和CA区分子层和多形层均逐渐增厚。其中,颗粒层和锥体细胞层细胞由小变大,染色由深变浅。细胞数量呈现先逐渐增加、P7 d最多、之后逐渐减少的趋势(P<0.01)。P28 d,海马形态接近成年海马,细胞数量无明显增加(P>0.05)。免疫组织化学染色发现,AKT、mTOR和LC3A主要表达在海马CA区锥体细胞层和DG区颗粒细胞层细胞的细胞质中。E18 d,海马CA区和DG区AKT、mTOR和LC3A阳性细胞排列稀疏,染色很浅,光密度低;E18 d~P7 d,AKT、mTOR和LC3A阳性细胞逐渐密集,染色逐渐加深,光密度逐渐增高,P7 d达高峰(P<0.05)。P14d~P21 d,AKT、mTOR和LC3A阳性细胞密集程度逐渐降低,染色逐渐变浅,光密度逐渐降低(P<0.05);P28 d,除LC3A的表达保持进一步降低的趋势之外(P<0.05),AKT和mTOR的表达都与P21 d无明显差异(P>0.05)。免疫印迹检测发现,各时间点都有AKT、mTOR和LC3A的表达,E18 d~P7 d,表达均逐渐增高,P7 d达高峰(P<0.01);P14 d~P21 d,表达逐渐降低(P<0.01);P28 d,mTOR和LC3A的表达仍进一步降低(P<0.01),而AKT的表达与P21 d无差异(P>0.05)。结论自噬相关蛋白AKT、mTOR和LC3A在小鼠海马发育过程中呈高表达。自噬与小鼠海马发育密切相关。
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