小球藻多糖的制备及芦苇生物活性成分的研究

来源 :大连海洋大学 | 被引量 : 6次 | 上传用户:hhkkpump
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本文以海洋小球藻(Chlorella spp)和芦苇(Phragmites australis)地上部分为材料,主要进行了两部分的研究:(一)小球藻多糖制备工艺的优化;(二)芦苇地上部分总黄酮制备工艺、化学成分及生物活性。对小球藻多糖提取进行了工艺优化,通过比较连续回流提取、超声波辅助提取、闪氏辅助萃取、酶解辅助闪式提取法,发现酶解辅助闪式提取的提取效率最高;并从六种酶中筛选出胰蛋白酶进行酶解,考察了酶解温度、酶用量、酶解时间和酶解pH,确定小球藻多糖酶解提取的较优工艺条件为:酶解温度为40℃、酶用量为1.5%、酶解时间为2h、pH为7.5。将小球藻多糖提取液进行除蛋白,乙醇分级沉淀后,进行Sepharose DEAE-52进行分离纯化,得到小球藻多糖,最终收率为3.75‰。对小球藻多糖进行了抑制肿瘤细胞培养液诱导的脐静脉内皮细胞的迁移活性测定,其浓度为50、100μg/mL时对肿瘤细胞培养液诱导的内皮细胞迁移具有较为明显的抑制作用。利用多种色谱技术对芦苇石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物进行了系统分离纯化,共分离得到13种化合物,通过理化常数测定,光谱数据分析,鉴定了其中7种化合物,分别为β-谷甾醇(β-sitosterol,L-1),对羟基苯甲醛(4-Hydroxybenzaldehyde,L-2),麦黄酮(Tricin;5,7,4’-trihydroxy-3’,5’-dimethoxy flavone,L-3),麦黄酮7-O-β-吡喃葡萄糖苷(Tricin7-O-β-glucopyranoside,L-4),单棕榈酸甘油酯(Glycerol alpha-monopalmitate,L-5),正丁基-O-β-D-吡喃果糖苷(n-butyl-O-β-D-fructopuranoside,L-6),胡萝卜苷(daucosterol,L-7)。其中L-3,L-4,L-5,L-6为首次从芦苇中分离得到。测定了芦苇的醇提物、不同溶剂萃取物部分对血管紧张素I转换酶的抑制活性,各部分对ACE的抑制活性均随着代测样品浓度增大而增大,其中,正丁醇层萃取物的抑制活性整体较好,在浓度为100mg/mL时,抑制率可以达到71.6%。石油醚层萃取物亦有一定的抑制活性。考察了闪式辅助萃取-热回流法提取制备芦苇总黄酮的工艺条件,热回流提取过程采用溶剂为95%乙醇,在此条件下的最佳工艺为料液比0.7:100,闪式提取5分钟,热回流2小时。结合5种大孔吸附树脂进一步富集总黄酮类物质,发现AB-8、HPD100型大孔吸附树脂的吸附率和解吸率都比较高,可进一步纯化总黄酮。考察了HPD100大孔吸附树脂对总黄酮的静态吸附,确定了上样浓度为0.053mg/mL、pH为6时,吸附率分别可达21.1%、32.6%。论文为充分利用海洋小球藻和芦苇资源提供了一定的理论依据。
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