论文部分内容阅读
由于减毒肠道细菌如沙门氏菌,具有通过口服并入侵宿主细胞的特性,减毒沙门氏菌作为核酸疫苗传递载体非常具有应用前景。在本研究中,我们构建了一株新型减毒沙门氏菌SL368,并将其作为载体传递和表达高致病性H5N1流感病毒的血凝素(HA)基因和神经氨酸酶(NA)基因,即沙门氏菌流感疫苗Sal-HA-NA。结果表明,我们构建的减毒沙门氏菌SL368表现出较高的基因传递效率以及对小鼠的低细胞毒性和低致病性。以BALB/c小鼠作为动物模型,我们研究了Sal-HA-NA的免疫效果。结果显示,通过口服免疫接种,Sal-HA-NA诱导小鼠产生了抗HA血清IgG、粘膜IgA以及分泌干扰素γ的T细胞。同时口服接种表达病毒HA和NA蛋白沙门氏菌流感疫苗的小鼠经过高致病性H5N1流感病毒以及H1N1流感病毒攻毒后全部存活下来,而口服接种携带空载质粒的沙门氏菌的小鼠全部死亡。这些结果表明Sal-HA-NA诱导机体产生了强烈的特异性体液和细胞免疫反应,并使机体获得了抵抗多种流感病毒的能力。此外,我们的研究还表明发展以减毒沙门氏菌为载体的新型口服疫苗抵抗流感病毒具有可行性。肝脏特异性的miR-122已被证实能够通过碱基配对的方式与乙肝病毒高度保守的前基因组RNA序列结合,进而抑制乙肝病毒基因的表达和复制。然而,在哺乳动物细胞中,miR-122的瞬间沉默效应和细胞毒性限制了其在治疗乙肝病毒感染方面的应用潜力。在本研究中,我们基于在细胞内指导合成siRNA样转录体的pSuper basic载体构建pSB-miR-122质粒,来持续表达miR-122延长抑制HBV基因表达的时间。同时用一种新型减毒沙门氏菌将pSB-miR-122质粒高效地带入肝脏细胞,大量表达miR-122,并且对小鼠无副作用。此外,口服接种表达miR-122沙门氏菌药物的小鼠体内乙肝病毒基因的表达受到了抑制。这些结果表明,表达miR-122的沙门氏菌药物介导的基因疗法可以抑制体内乙肝病毒基因的表达。