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病毒性脑炎是由病毒引起的一种脑膜和脑实质的炎症,是小儿较常见的中枢神经系统的感染性疾病,而疱疹病毒则是引起病毒性脑炎较主要的病因,其中具有代表性的是单纯疱疹病毒1型和2型(HSV-1、HSV-2)、水痘-带状疱疹病毒(VZV)、人巨细胞病毒(CMV)、EB病毒(EBV)、人类疱疹病毒6型(HHV-6A、HHV-6B)。疱疹性脑炎有着较高的发病率和死亡率,不及时治疗易留下严重的神经功能缺陷。而早期大剂量的抗病毒治疗可使死亡率显著降低,存活率提高,因此疱疹性脑炎的疗效评价关键在于早期诊断,而早期诊断和及时的治疗需依赖实验室的诊断。在本研究中,以人疱疹病毒DNA多聚酶基因区为靶序列,设计多重引物和寡核苷酸探针,制成基因芯片,建立可同时检测单纯疱疹病毒1型和2型(HSV-1、HSV-2)、水痘-带状疱疹病毒(VZV)、爱泼斯坦-马尔病毒(EBV)、人巨细胞病毒(CMV)和人类疱疹病毒6型(HHV-6A、HHV-6B)等七种人疱疹病毒的多重PCR-基因芯片技术;对临床疑似病毒性脑炎的290份脑脊液标本进行PCR-基因芯片杂交检测,取得良好结果。目的建立一种能同时快速检测临床常见人疱疹病毒的新技术,探讨儿童疱疹性脑炎的快速诊断新方法。方法在人疱疹病毒的DNA多聚酶基因区设计引物和寡核苷酸探针,同时扩增单纯疱疹病毒1型和2型(HSV-1、HSV-2)、水痘-带状疱疹病毒(VZV)、爱泼斯坦-马尔病毒(EBV)、人巨细胞病毒(CMV)和人类疱疹病毒6型(HHV-6A、HHV-6B)等多种人疱疹病毒;建立七种人疱疹病毒的多重PCR-基因芯片技术。对临床疑似病毒性脑炎的290份脑脊液标本进行PCR-基因芯片杂交检测,同时以临床常规疱疹类病毒系列荧光定量PCR试剂盒检测结果作比较;并将阳性标本经分子克隆后测序。选同期非病毒感染疾病住院的患儿30例脑脊液标本作为对照组(癫痫18例,化脓性脑膜炎12例)。结果人疱疹病毒PCR-基因芯片能检测到10拷贝的上述疱疹类病毒数;各疱疹类病毒间的探针信号不相互干扰,细菌、真菌、乙肝病毒及人基因组DNA等对照品无杂交信号。用该多重PCR-基因芯片技术对临床疑似为病毒性脑炎的290份脑脊液标本进行检测,共检出11份阳性标本,其中HSV-13例,HSV-22例,EBV 1例,CMV 1例,HHV-6A 2例,HHV-6B 1例,HSV-2和CMV混合感染1例,阳性率为3.8%。与TaqMan荧光定量PCR法比较,其敏感度为91.7%,特异性为100%;并将11份阳性标本分子克隆后测序,与基因库中相应病毒序列比较,其同源性大于98%。30例非病毒感染疾病住院的患儿脑脊液标本7种人疱疹病毒的DNA检测均阴性。并对11例阳性标本进行病案检索,其中2例为临床确诊的疱疹性脑炎,另外9例均为临床病因不明的病毒性脑炎,PCR-基因芯片技术为其提供了明确的病原学诊断,并为开始明确而有效的抗病毒治疗提供了实验室依据。结论建立的人疱疹病毒多重PCR-基因芯片技术,可同时检测7种人疱疹病毒,其检测快速简便、特异性及敏感性高、高通量,为儿童疱疹性脑炎提供早期、特异的病原学诊断依据。