论文部分内容阅读
背景：支架内再狭窄是支架置入后血管壁受牵张和损伤引起的以内膜增生为主,以炎症性愈合反应为特征的病理过程。炎症细胞及炎症因子在支架再狭窄中起了重要作用,有效抑制炎性细胞的增殖和减少相关因子的表达可能是防治支架再狭窄的最佳途径之一。目的：探讨犬颈动脉粥样硬化狭窄支架成形术后新生内膜中正五聚体蛋白3(Pentraxin3, PTX3)的表达情况及法舒地尔对其的干预机制。方法：1、选取健康雄性比格犬19只,适应性普通饲料喂养1周。将实验动物随机分组为对照组(n=4)、造模组(n=15),造模组动物在麻醉下行单侧颈总动脉氮气干燥结合球囊扩张术建立颈动脉粥样硬化狭窄模型,对照组仅分离暴露血管,不进行损伤。术后高脂饲料喂养至颈动脉彩超与动脉血管造影确定模型建立的成功。2、随机选取4只健康比格犬为对照组(A组,n=4),经前期颈动脉粥样硬化造模犬8只,分为支架组(B组,n=4)、支架+药物干预组(C组,n=4)。造影后将8枚金属裸支架分别置入B、C组一侧颈动脉。C组支架置入后静脉输注法舒地尔进行干预,A、B组输注生理盐水进行对照。术后普通饲料喂养8周,后复查血管造影,观察支架后血管狭窄情况。造影结束后,获取目标血管,行HE染色及弹力纤维染色观察病理形态学变化,免疫组化染色分析增殖细胞核抗原(PCNA)、巨噬细胞标记因子(CD68)、PTX3表达情况,RT-PCR技术和Western-blot法分别测定PTX3mRNA及蛋白表达情况。采用SPSS17.0软件进行统计学分析。计量数据以x±s表示,组间比较用t检验,多组均值比较用单因素方差分析(one-way ANOVA),P<0.05表示差异有统计学意义。结果：1、造模后4周与8周彩超结果显示：8周后造模组内膜中层明显增厚(IMT)、血流阻力(RI)增大,收缩期血流峰值速度(PSV)、舒张末期血流速度(EDV)、血管内径减小,差异有统计学意义(P<0.05)。血管造影结果显示：造模组狭窄直径百分比(D-sten%)及狭窄面积百分比(A-sten%)均大于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。2、支架置入后8周血管造影结果示：B组狭窄直径百分比、狭窄面积百分比均大于A组,差异有统计学意义(P<0.05),C组狭窄百分比大于A组,B组狭窄百分比大于C组,差异无统计学意义(P>0.05)。3、病理形态学观察：支架置入后8周,A组颈总动脉内膜光滑,为单层内皮细胞,中膜以平滑肌细胞为主,呈长形或椭圆形,外膜为结缔组织,无新生血管,管腔呈较规整圆形。B、C组颈动脉内膜不平整,细胞排列紊乱,可见大量炎性细胞及增生的内皮细胞、平滑肌细胞,新内膜形成。中层平滑肌细胞相对减少,纤维组织增生。细胞外基质成分大量堆积,血管腔狭窄。B、C组新生内膜厚度、新生内膜面积(NIA)、内弹力膜面积(IEM)、管腔狭窄指数(NIA/IEM)均大于A组,差异有统计学意义(P<0.05),C组各检测指标均小于B组,差异无统计学意义(P>0.05)。4、免疫组化结果：应用专业图像分析软件测得平均光密度值(OD值)进行半定量分析,结果：PTX3、CD68、PCNA在A组中有一定表达。B组三检测指标OD值均高于A、C组,差异有统计学意义(P<0.05),C组PTX3OD值高于A组,差异有统计学意义(P<0.05)。C组CD68、PCNA表达量OD值高于A组,差异无统计学意义(P>0.05)。5、PTX3mRNA及蛋白表达结果显示：A组、C组表达量均低于B组,差异有统计学意义(P<0.05),A组表达量低于C组,差异无统计学意义(P>0.05)。PTX3蛋白表达量分析结果同mRNA。结论：1、利用氮气干燥结合球囊扩张术损伤犬颈动脉内膜,配合高脂饮食,能够快速有效的建立犬颈动脉粥样硬化狭窄模型。2、正常颈动脉组织中PTX3有一定表达,颈动脉支架置入术后PTX3在新生内膜中表达明显增加,说明PTX3参与了支架内再狭窄的形成。3、法舒地尔能抑制PTX3基因和蛋白的表达,减少巨噬细胞浸润,并抑制平滑肌细胞的迁移和增殖,从而减轻新生内膜形成,这一作用可能有利于支架后再狭窄的防治。