刺激隐核虫又名海水小瓜虫,属于隐核虫科的隐核虫属,是一种专性寄生虫,分布于热带和亚热带海域,可侵染大黄鱼、石斑鱼等大部分海水养殖鱼类,造成极大危害。抑动抗原是刺激隐核虫多种具免疫原性的表面抗原其中之一,可以诱导鱼体产生能使刺激隐核虫凝集或抑动的抗体,是抗刺激隐核虫疫苗的候选成分之一。枯草芽孢杆菌是一种常用的益生菌,细胞壁结构简单,表达产物可直接分泌到培养基中而不分泌内毒素,是良好的表达宿主菌。本研究在实验室已经构建了一株产抑动抗原DT1749的大肠杆菌工程菌的基础上,使用基因工程技术将抑动抗原基因DT1749克隆并连接至大肠杆菌-枯草芽孢杆菌穿梭质粒pMA5,并将其导入枯草芽孢杆菌SCK6菌株中,构建了产抑动抗原的枯草芽孢杆菌工程菌SCK6-DT1749。将SCK6-DT1749进行摇瓶培养,以存活孢子数为指标,优化培养条件,得到最优培养基及培养条件。经过正交试验数据分析,得出枯草芽孢杆菌SCK6-DT1749的最佳碳源为豆饼粉、最佳氮源为玉米浆干粉、最佳培养温度为37℃、最佳接种量为6%、最佳初始PH为8、最佳培养时间为72h。根据培养条件优化结果,并结合实际工业需求设计了 SCK6-DT1749的发酵工艺流程,制定了发酵计划。本研究借助枯草芽孢杆菌表达系统的安全性优势,解决了在前期实验中产抑动抗原大肠杆菌会分泌内毒素及会形成包涵体等诸多问题,并完成了工程菌的培养条件优化,为生产食品级的抗刺激隐核虫益菌剂奠定了基础。