绿茶提取物表没食子儿茶素没食子酸酯对结直肠癌作用的体外研究

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[目的]探讨表没食子儿茶素没食子酸酯(epigallocatechin-3-gallate, EGCG)对结直肠癌细胞增殖的抑制作用及其作用机理。[方法]体外培养结直肠癌细胞(LoVo细胞、SW480细胞、HT29细胞、HCT-8细胞),采用不同浓度的EGCG(10mg/L、20mg/L、35mg/L)对其进行干预,MTT法检测EGCG对结直肠癌细胞增殖的抑制作用;用流式细胞仪检测EGCG对结直肠癌细胞凋亡和细胞周期的影响;实时荧光定量PCR检测EGCG干预后的结直肠癌细胞的Notch、Notch2、HES1、JAG1基因的表达情况;Western blot检测EGCG干预后的结直肠癌细胞的Notch1、Notch2、 HES1、JAG1蛋白的表达情况。[结果]MTT法检测EGCG对结直肠癌细胞的增殖具有抑制作用。EGCG对结直肠癌细胞的增殖抑制作用具有剂量依赖性,并且对HT29细胞的增殖抑制作用具有时间依赖性。流式细胞仪检测EGCG能增强结直肠癌细胞的凋亡率,且剂量与细胞凋亡率呈正相关,实验组(35mg/L)与对照组(0mg/L)相比,有统计学意义。EGCG能将SW480细胞和LoVo细胞细胞周期阻滞在Go/G1期,阻碍其向S期转入,将HCT-8细胞阻滞在G2/M期,阻碍其向M期转入,将HT29细胞阻滞在S期,阻碍其向G2期转入,抑制结直肠癌细胞的增殖。实时荧光定量PCR检测EGCG能上调结直肠癌细胞的Notch1基因的表达,下调Notch2、JAG1和HES1基因的表达; Western blot检测EGCG能上调结直肠癌细胞的Notchl蛋白的表达,下调Notch2蛋白的表达,对HES1和JAG1蛋白的表达有下调趋势,但均没有统计学意义(p>0.05)。[结论]EGCG对体外培养的结直肠癌细胞的增殖有明显抑制作用,其作用机制与诱导细胞凋亡和影响细胞周期,上调Notch1基因的表达,下调Notch2、JAG1和HES1基因的表达及上调Notch1蛋白的表达和下调Notch2蛋白的表达有关。
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