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实验目的： 1、通过对慢性阻塞性肺疾病急性加重期(acute exacerbation of chronicobstructive pulmonary diseases，AECOPD)患者肺功能分级与Wnt信号通路中β-catenin、RhoA、Wnt5a基因的表达量的相关性分析，探讨Wnt信号通路在COPD气道重建的作用。 2、运用苗药干预Wnt信号通路来探讨其作用机制。 实验方法： 一、临床实验选取AECOPD患者80人，按照肺功能分为GOLD1-4组，每组各20人，同时选取20人为实验对照组，所有人抽血采用RT-PCR检测β-catenin、RhoA、Wnt5a基因的表达量。 二、动物实验： 1、将120只SD雄性大鼠随机分为正常组和COPD组。采用烟熏联合气管内注射脂多糖进行造模后再为COPD空白组、苗药低、中、高以及地米组。 2、取完整右肺中叶用于免疫组织化学半定量积分法，观察COPD大鼠肺组织中β-catenin、RhoA、Wnt5a蛋白分布积分情况。采用组织块贴壁法行成纤维细胞的培养后用免疫蛋白印迹法(Western Blot，WB)检测各组气道成纤维细胞中β-catenin、Wnt5a、RhoA蛋白含量。实时荧光定量PCR(Real-Time fluorescencequantItative PCR，RT-PCR)检测各组气道成纤维细胞中β-catenin、Wnt5a、RhoAmRNA表达量。酶联免疫法(ELISA)法检测各组成纤维细胞上清液TGF-β1、PDGF、MMP-9的表达量。 3、探讨药物干预后β-catenin、Wnt5a、RhoA蛋白的分布、mRNA的表达情况、TGF-β1、PDGF、MMP-9分泌情况以及二者之间的相关性。 数据处理： 依据数据资料的各自属性对各组数据运用SPSS16.0进行统计学分析。计数资料比较运用x2检验。计量资料符合正态性分布运用One-Way ANOVA;计量资料不符合正态分布及等级资料采用秩和检验。运用Sperman或Pearson进行相关性分析。 实验结果： 一、临床实验 1、同正常人相比，β-catenin、RhoA、Wnt5a基因表达量在AECOPD患者中均表达增加，且随着肺功能分级增加有表达量增加的趋势，但GOLD3级与GOLDD4级没有差异。 2、β-catenin、Wnt5a、RhoA基因的表达量与FVC％、FEV1％、FEV1/FVC％均存在负相关。 二、动物实验 1、COPD大鼠成纤维细胞中Wnt信号通路三条途径中Wnt5a、RhoA、β-cateninmRNA、蛋白表达量较正常组比较增加，其下游的MMP-9、PDGF、TGF-β1也较正常组增加，且两者呈正比例关系。 2、苗药紫金牛、铁扫帚与糖皮质激素均具有抑制PDGF、TGF-β1、MMP-9炎症因子的作用，其中MMP-9、TGF-β1以苗药中最明显;PDGF以苗药高最明显。 3、苗药对Wnt信号通路中的三条途径均具有作用，但苗药高对Wnt/β-catenin途径、Wnt/pcp途径抑制最明显。对Wnt/Ca2途径的抑制以苗药中、高比较明显。 4、免疫组化表明COPD大鼠中β-catenin、Wnt5a、RhoA蛋白发生了异常表达分布。 实验结论： 1、Wnt信号通路参与了COPD的气道重塑。 2、Wnt信号通路与AECOPD患者肺功能受损程度存在相关性。 3、Wnt通路在COPD中被激活，通过增加PDGF、TGF-β1、MMP-9炎症因子的表达而参与气道重塑。 4、通过降低Wnt通路中β-catenin、Wnt5a、RhoA基因，抑制的PDGF、TGF-β1、MMP-9炎症因子是苗药紫金牛、铁扫帚干预COPD气道重塑的机制之一。 5、选用中剂量的苗药调控Wnt信号通路干预气道重塑更为合适。