绿茶和红茶水提物的降血糖活性与抑制糖吸收的机理研究

来源 :华中农业大学 | 被引量 : 5次 | 上传用户:q28100125
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茶(Camellia sinensis(L.)O.Kuntze)因其独特的风味和丰富的保健功能而风靡世界。不同种类的茶由于所含生物活性成分不同,其保健功能也有所差异。本文以同一批鲜叶加工而成的绿茶和红茶为原料,比较绿茶和红茶水提物降血糖活性,进而从动物实验、体外和Caco-2细胞模型探索绿茶和红茶水提物及其活性成分对α-葡萄糖苷酶和钠钾ATP酶活性影响机理,为糖尿病患者饮茶减缓糖尿病症状提供依据。主要研究内容及结果如下:1.绿茶和红茶水提物对糖尿病小鼠降血糖活性分析分别以绿茶和红茶水提物灌胃链脲佐菌素诱导的糖尿病模型小鼠4周,观察茶水提物处理对糖尿病小鼠在血糖、体重、摄食、饮水、小肠麦芽糖酶和蔗糖酶活性及小肠、心脏、肝脏和肾脏钠钾ATP酶活性的影响。研究发现,灌胃绿茶和红茶水提物糖尿病小鼠饮水和摄食量较糖尿病对照组略有降低,但对糖尿病小鼠体重没有影响。灌胃绿茶和红茶水提物小鼠高血糖症状明显好转,小鼠血糖值分别为20.3mmol/L和19.1 mmol/L,较糖尿病对照组(29.7 mmol/L)显著降低(p<0.05)。糖尿病小鼠小肠麦芽糖酶和蔗糖酶较正常小鼠分别升高80.6%和144.6%。灌胃绿茶和红茶水提物后糖尿病小鼠小肠麦芽糖酶分别下降19.3%和21.4%,蔗糖酶分别下降33.1%和26.5%,但其麦芽糖酶和蔗糖酶活性仍高于正常小鼠(p<0.05)。糖尿病小鼠体内多器官钠钾ATP酶活性异常,其中心脏钠钾ATP酶活性较正常小鼠下降18.4%,而小肠、肝脏和肾脏钠钾ATP酶活性较正常小鼠分别升高53.3%、25.4%和12.8%。灌胃红茶水提物能提高糖尿病小鼠心脏钠钾ATP酶活性,但其活性仍低于正常小鼠(p<0.05)。灌胃红茶水提物对糖尿病小鼠小肠、肝脏及肾脏钠钾ATP酶活性均有抑制作用,其活性可以达到正常小鼠水平(p<0.05)。灌胃绿茶水提物只对糖尿病小鼠小肠和肾脏钠钾ATP酶活性具有抑制作用。2.绿茶和红茶水提物体外对α-葡萄糖苷酶和钠钾ATP酶活性的影响分别以对硝基苯-α-D-吡喃葡萄糖苷(pNPG)和麦芽糖、蔗糖为底物比较了绿茶和红茶水提物对酵母来源α-葡萄糖苷酶和小鼠小肠匀浆麦芽糖酶和蔗糖酶活性的影响,结果发现在pNPG-酵母来源α-葡萄糖苷酶抑制模型中红茶水提物抑制效果优于绿茶水提物,IC50值分别为10.37μg/mL和20.70μg/mL;而在麦芽糖/蔗糖-小鼠小肠麦芽糖酶/蔗糖酶抑制模型中绿茶水提物抑制效果优于红茶水提物,抑制麦芽糖酶IC50值分别为129.48μg/mL和1156.26μg/mL,抑制蔗糖酶IC50值分别为315.15μg/mL和907.19μg/mL。不同体外酶-抑制剂模型筛选结果不同,以麦芽糖、蔗糖为底物进行α-葡萄糖苷酶抑制活性筛选更接近体内实际情况,能更准确定向筛选α-葡萄糖苷酶抑制剂作用位点。对绿茶和红茶水提物及内含成分体外钠钾ATP酶活性影响进行比较和分析。研究发现,红茶水提物体外钠钾ATP酶抑制活性强于绿茶水提物,IC50值分别为185.27μg/mL和330.38μg/mL。茶黄素为红茶水提物中抑制钠钾ATP酶主要活性成分,茶黄素-3,3’-双没食子酸(TFDG)抑制活性最强,IC50值仅为24.30μmol/L。茶水提物活性成分抑制钠钾ATP酶构效关系分析发现,茶黄素羟基数目与钠钾ATP酶抑制活性呈正相关;没食子酸酯基团为儿茶素发挥钠钾ATP酶抑制活性关键基团;儿茶素B环5’位羟基在发挥钠钾ATP酶抑制活性中起作用;顺式构象儿茶素抑制钠钾ATP酶活性更强。以TFDG为抑制剂,在不同浓度ATP、钠离子、钾离子条件下对钠钾ATP酶抑制类型进行动力学分析发现,TFDG与ATP竞争型抑制钠钾ATP酶,与钠离子和钾离子混合型抑制钠钾ATP酶。3.绿茶和红茶水提物对Caco-2细胞上α-葡萄糖苷酶和钠钾ATP酶活性及葡萄糖吸收的影响以Caco-2细胞模型模拟小肠上皮细胞,比较绿茶和红茶水提物对细胞上麦芽糖酶、蔗糖酶、钠钾ATP酶及葡萄糖吸收的影响。研究发现,在麦芽糖/蔗糖-Caco-2细胞麦芽糖酶/蔗糖酶抑制模型中绿茶水提物抑制效果优于红茶水提物,抑制麦芽糖酶IC50值分别为57.62μg/mL和60.98μg/mL,抑制蔗糖酶IC50值分别为35.20μg/mL和102.75μg/mL。在低葡萄糖浓度(5.56 mmol/L)和高葡萄糖浓度(25.00 mmol/L)条件下绿茶和红茶水提物均抑制Caco-2细胞葡萄糖吸收,绿茶水提物抑制葡萄糖吸收活性强于红茶水提物。绿茶和红茶水提物抑制葡萄糖吸收主要通过抑制钠-葡萄糖共转运载体1(SGLT1)来实现。400μg/m L绿茶和红茶水提物对SGLT1转运葡萄糖活性抑制率分别为29.36%和15.67%。绿茶和红茶水提物对Caco-2细胞膜上钠钾ATP酶活性具有抑制作用,其抑制作用随着茶水提物孵育浓度的增加而增强。绿茶和红茶水提物可能通过抑制Caco-2细胞膜上钠钾ATP酶活性抑制SGLT1转运葡萄糖。荧光定量PCR和western blot结果显示,绿茶和红茶水提物可在转录和翻译水平调节蔗糖酶-异麦芽糖酶复合体(SI)的mRNA和蛋白表达量,从而降低麦芽糖酶和蔗糖酶活性。绿茶和红茶水提物对SGLT1和葡萄糖转运载体2(GLUT2)在转录和翻译水平调节具有选择性:绿茶水提物更易于调节SGLT1;红茶水提物更易于调节GLUT2。绿茶和红茶水提物可通过调节钠钾ATP酶mRNA和蛋白表达量抑制小肠葡萄糖吸收。
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