枸杞总黄酮对乳腺癌细胞增殖、迁移、侵袭的影响及机制探讨

来源 :宁夏医科大学 | 被引量 : 2次 | 上传用户:zzz999z
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黄酮类化合物在植物中广泛存在,也是许多植物药材的重要活性成分,对乳腺癌、肺癌、白血病、胃癌等都有良好的抑制作用,其效果包括抑制细胞增殖、抑制细胞周期、促进凋亡、抑制迁移与侵袭等。枸杞是我国传统名贵中药,具有抗炎、抗肿瘤等效果,黄酮类化合物也是其主要成分之一。但是,来源于枸杞的总黄酮对乳腺癌的作用目前尚无报道。目的:探究枸杞总黄酮(TFLb)对不同类型乳腺癌细胞增殖、迁移、侵袭等能力的影响,并探讨其相关分子机制。方法:选用雌激素受体α(ERα)阳性的MCF-7乳腺癌细胞和三阴乳腺癌细胞MDA-MB-231,使用不同浓度的TFLb处理,检测其对乳腺癌细胞增殖、迁移、侵袭能力的作用。1.使用CCK-8实验检测细胞增殖能力的变化,同时以正常乳腺上皮细胞MCF-10A作为对照;2.通过细胞划痕实验和Transwell实验检测细胞迁移与侵袭能力的变化;3.使用流式细胞术检测细胞周期与凋亡情况的变化;4.使用q PCR检测PCNA等分子指标m RNA的表达水平的变化;5.使用Western Blot检测PCNA、MMP-2等分子指标在蛋白水平的变化;为明确TFLb的作用机制,使用Western Blot检测Rho A、Rac1/Cdc42、ERα、NF-κB、β-catenin、Akt、m TOR等细胞信号通路关键分子蛋白的变化。结果:1.TFLb呈剂量依赖性抑制乳腺癌细胞增殖。作用48h后,200μg·m L-1TFLb对MCF-7细胞、100μg·m L-1 TFLb对MDA-MB-231细胞的抑制率超过90%,但是不抑制正常乳腺上皮细胞MCF-10A的增殖。2.45,90μg·m L-1 TFLb作用于MCF-7、或者30,60μg·m L-1 TFLb作用于MDA-MB-231细胞时对增殖无影响,但是能抑制乳腺癌细胞的迁移与侵袭能力。3.45,90μg·m L-1 TFLb作用于MCF-7细胞周期被阻滞在G0/G1期,30,60μg·m L-1 TFLb作用于MDA-MB-231细胞时细胞周期被阻滞在G2期。4.135μg·m L-1 TFLb作用于MCF-7、或者90μg·m L-1 TFLb作用于MDA-MB-231细胞时能促进细胞凋亡,并改变细胞内Bcl-2/Bax蛋白的比例。5.分别用45,90,135μg·m L-1 TFLb作用于MCF-7、和30,60,90μg·m L-1 TFLb作用于MDA-MB-231细胞48h后,两株细胞内Akt1的磷酸化水平降低,Akt和β-catenin蛋白减少,另外,MCF-7细胞中Rho A、Rac1/Cdc42、NF-κB、ERα蛋白含量降低,MDA-MB-231细胞中m TOR与Rac1/Cdc42仅在90μg·m L-1 TFLb作用时减少。结论:TFLb能抑制两种不同类型的乳腺癌细胞的增殖、迁移、侵袭,抑制其细胞周期并促进凋亡,但是不抑制正常乳腺上皮细胞的增殖。TFLb对MCF-7细胞和MDA-MB-231细胞的有效浓度存在差异,作用途径也有所不同,β-catenin与Akt是两株细胞中共同的效应位点。
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