【摘 要】
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油菜核盘菌是一种破坏力很强的植物病原真菌,严重威胁着油菜的产量和品质。为了进一步了解和防治该病害,本文做了以下两方面的研究:
1:交替氧化酶是真菌抗氰呼吸的末端氧
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油菜核盘菌是一种破坏力很强的植物病原真菌,严重威胁着油菜的产量和品质。为了进一步了解和防治该病害,本文做了以下两方面的研究:
1:交替氧化酶是真菌抗氰呼吸的末端氧化酶。为了在蛋白水平上研究核盘菌交替氧化酶的功能,我们用大肠杆菌表达了该基因,并制备了其多克隆抗体。首先以核盘菌cDNA为模板,通过PCR技术获得其AOX基因3端约350bp的序列,并将两段该序列串连起来,将串连的序列克隆进表达载体pET-32a中,在大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达出分子量约为45 kDa的融合蛋白。融合蛋白经IMAC层析柱纯化,得到高纯度的融合蛋白。用纯化蛋白免疫新西兰白兔,获得了融合蛋白的抗血清,间接ELISA法测定抗血清效价大于1∶500000。Western blot结果显示抗血清不仅可以与融合蛋白特异性结合,还可与从核盘菌提取物中的交替氧化酶特异性反应。因此所制备的抗血清可用于从蛋白水平上研究核盘菌交替氧化酶的功能。
2:已有很多研究报道了WRKY转录因子在调控植物应对病原微生物胁迫当中的作用,但却鲜有关于油菜WRKY转录因子的研究。BnWRKY40是从油菜中新分离的一个WRKY类转录因子基因,文献初步证实其在油菜受核盘菌侵染后表达会显著上调。为了进一步明确其在油菜抗核盘菌中的作用,我们扩增了其编码区序列,并将其编码区分别正向和反向克隆进植物表达载体pBin438,构建了BnWRKY40基因的正义载体pBin438-BnWRKY40和反义载体pBin438-aBnWRKY40。将以上载体通过农杆菌介导叶盘法转化烟草以及子叶法转化油菜,经过卡那霉素筛选和PCR检测鉴定,获得了一些正义载体转化的油菜以及反义载体转化的烟草。
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