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多杀菌素(spinosyn)是由刺糖多孢菌(Saccharopolyspora spinosa)经有氧发酵产生的一类新型大环内酯类化合物。它是一种低毒、低残留、对昆虫天敌安全、作用机理独特的天然杀虫剂。本试验通过建立刺糖多孢菌原生质体制备再生最佳条件,运用抗性耐受突变及基因组重排技术,开展了刺糖多孢菌高产多杀菌素的菌株选育工作。试验结果显示S.spinosa原生质体制备的最佳条件为250mL三角瓶(带有不锈钢弹簧)装50ml含10%蔗糖的TSB培养基、孢子悬液接种,28℃,200r/min培养48h;3000r/min收集菌丝体并用0.3mol/L蔗糖清洗一次;用含3mg/mL溶菌酶P缓冲液悬浮菌丝体,32℃下处理100min;M-G培养是最合适的原生质体再生培养基;原生质体可在—70℃保存。以刺糖多孢菌N229-17(多杀菌素产量334μg/mL)和C131-24(多杀菌素产量279μg/mL)为出发菌株,进行原生质体亚硝酸和微波诱变,筛选Str~+和Gen~+抗性菌株,结果显示菌株的抗性水平与多杀菌素产量呈正相关,并得到了菌株Y23(Str~+ Gen~-)和W16(Str~-Gen~+)。通过Y23和W16进行原生质体融合研究试验,结果显示40%的PEG1000对原生质体融合有很好的促进作用。以Y23、W16、P131、U108-41和N613为亲本菌株进行基因组重排研究,结果显示随着重排深入,高产菌株出现频率增加。通过3轮Genome shuffling处理,筛选获得菌株F113(528μg/mL),发酵效价较原始菌株N229-17提高了58.1%,传代试验表明菌株稳定性好。