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奶牛乳房炎是造成奶牛业巨大经济损失的重要疾病，由各种病原菌感染引起，其中链球菌（Streptococcus）就是一类很重要的致病菌。引起奶牛乳房炎的链球菌有停乳链球菌（S.dysgalactiae）、无乳链球菌（S.agalactiae）和乳房链球菌（S. uberis）。GapC蛋白是链球菌表面的一种主要毒力因子，具有良好的抗原性，且在这三种链球菌之间具有很好的交叉免疫保护作用。研究表明S.dysgalactiaeGapC蛋白第1-150位氨基酸(GapC1-150aa)具有与全长相近的免疫保护率。为了进一步研究其免疫保护作用机理和研制有效的预防链球菌感染的新型疫苗，本研究制备了抗S.dysgalactiae GapC1-150aa的单克隆抗体并进行了B细胞抗原表位分析。本实验用纯化的GapC1-150aa蛋白免疫46周龄的雌性BALB/c小鼠，利用杂交瘤技术获得11株能够稳定分泌抗体的杂交瘤细胞株，并采用小鼠体内诱生法大量制备抗体，用辛酸硫酸铵法和rProteinG纯化试剂盒纯化抗体。通过抗体亚类鉴定、交叉试验、抗体稳定性试验等证明，11株单抗特异性良好，且均能与停乳链球菌GapC1-150aa蛋白发生特异性结合。利用噬菌体12肽库试剂盒对11株单克隆抗体进行淘选，淘选出的噬菌体用夹心ELISA方法筛出亲和力高的阳性克隆，并进行DNA测序，通过生物信息学软件与GapC序列进行比对分析，获得了3株具有代表性的高亲和力单抗1F2、1E11、5B7，对应的氨基酸序列依次分别是TRINDLT、TGFFASK、DTTQGRFDGT。将这3个氨基酸序列分别逐一进行单个氨基酸定点突变，并用相应的单抗进行检测，确定了各表位中发挥作用的关键性氨基酸。氨基酸序列比对显示，这3个表位均具有高度的保守性；分别用上述三种链球菌进行全菌体ELISA检测，证明3个表位均暴露在菌体表面；通过调理吞噬试验证明，3株抗体均能很好地增强巨噬细胞和中性粒细胞吞噬功能；被动免疫后，攻毒结果显示3株单抗及其表位均有较好的免疫保护作用。该研究不仅有助于深入认识链球菌GapC的免疫保护机制，建立以单抗为基础的检测方法，而且为将来研制新型的多表位疫苗打下了坚实的基础。