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目的:探讨骨髓基质细胞及其产生的细胞外基质成分和基质细胞因子对急性淋巴细胞白血病细胞阿糖胞苷化疗敏感性的影响。
方法:1．构建急性淋巴细胞白血病细胞Sup-B15-骨髓基质细胞OP9共培养模型，电子显微镜下观察细胞生长情况；2．实验分组：(1)骨髓基质细胞组：①Sup-B15与OP9共培养组；②Sup-B15与灭活的OP9共培养组；③白血病细胞Sup-B15对照组；(2)细胞培养液组：①Sup-B15与OP9共培养液组；②OP9单独培养液组；③Sup-B15单独培养液对照组；3．通过CCK-8法观察不同浓度阿糖胞苷(Ara-C)对每实验组Sup-B15细胞增殖活力的影响，计算细胞生长抑制率和半数抑制浓度(IC50);4．采用流式细胞仪(FCM)检测各实验组Sup-B15细胞24h的凋亡率；5.Western-blot检测各个实验组的Sup-B15细胞中的Bcl-2蛋白表达情况，并作半定量分析。
结果:1．成功构建急性淋巴细胞白血病细胞Sup-B15-骨髓基质细胞OP9共培养模型，在倒置显微镜下观察到，共培养30min， Sup-B15开始黏附于骨髓基质细胞层，4h后达约70％;2.CCK-8法观察到，骨髓基质细胞组中，Sup-B15与OP9共培养组、Sup-B15与灭活的OP9共培养组的IC50分别为0.510μg/mL，、0.339μg/mL，均明显高于Sup-B15对照组(IC50为0.091μg/mL)；在观察不同细胞培养液对Ara-C细胞毒作用的抑制时发现，只有Sup-B15与OP9共培养培养液组出现抑制作用，其IC50为0.204μg/mL，而OP9单独培养液组和Sup-B15单独培养液对照组的IC50分别为0.087μg/mL，0.097μg/mL。3．流式细胞术检测结果显示，骨髓基质细胞组中，Sup-B15与OP9共培养组、Sup-B15与灭活OP9共培养组均明显抑制了Ara-C的凋亡诱导效应，其凋亡率分别为6.67±2.19％，8.95±3.04％，与Sup-B15对照组(20.46±2.63％)比较有显著性差异(P＜0.05)；在不同细胞培养液组中，Sup-B15与OP9共培养液组的凋亡率为11.16±2.97％，与Sup-B15培养液对照组(19.25±1.57％)比较有显著差异(P＜0.05），而骨髓基质细胞OP9培养液组未能显示出明显抑制Ara-C的凋亡诱导效应。4.Western-blot检测结果显示，各个实验组培养48h后Sup-B15细胞均表达Bcl-2蛋白。骨髓基质细胞组中，Sup-B15与OP9共培养组、Sup-B15与灭活的OP9共培养组Bcl-2蛋白表达升高，与Sup-B15对照组比较差异均有统计学意义(P＜0.05）；在不同细胞培养液组中，Sup-B15与OP9共培养液组Bcl-2蛋白表达亦升高，与Sup-B15培养液对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05)；而OP9培养液组与Sup-B15培养液对照组比较差异无明显统计学意义(P＞0.05)。
结论:骨髓基质细胞OP9及其产生的细胞外基质成分和基质细胞因子等骨髓微环境成分参与诱导了Sup-B15细胞阿糖胞苷化疗敏感性的下降。