雌激素受体共调节因子GA5的生物学功能研究

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目的为研究雌激素受体共调节因子GA5在乳腺癌细胞中的作用及其分子机制。方法运用免疫共沉淀方法验证GA5与ERβ在细胞内的相互作用,运用westernblot检测不同乳腺癌细胞中及人乳腺癌组织中GA5的表达;以人乳腺癌文库为模板,运用PCR技术、细胞培养、慢病毒包装等技术构建了pCDH-GA5质粒,在此基础上建立GA5过表达乳腺癌细胞系,运用免疫荧光实验观察GA5在细胞内的定位;建立GA5敲低乳腺癌细胞系,并运用RT-PCR技术、western blot等技术检测其敲低效果;运用生长曲线实验、软琼脂实验以及平板克隆形成实验观察GA5对乳腺癌细胞生长的影响。结果验证了GA5与ERβ在细胞内相互结合,GA5在不同乳腺癌细胞系中普遍表达,在人乳腺癌组织中表达低于癌旁组织;构建了pCDH-GA5表达载体,并建立了GA5过表达乳腺癌细胞系,证实GA5定位于细胞核;建立GA5敲低乳腺癌细胞系;实验证实GA5能抑制乳腺癌细胞的锚定依赖性生长、非锚定依赖性生长以及平板克隆形成能力。结论GA5与ERβ在体内相互作用,GA5在乳腺癌组织中的表达低于癌旁组织;成功建立GA5过表达和敲低乳腺癌细胞系;GA5抑制乳腺癌细胞的生长。
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