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在内分泌恶性肿瘤中,甲状腺癌是最常见的一种,它是发病率增长最快的实体肿瘤。甲状腺未分化癌（anaplastic thyroid carcinoma,ATC）是一种未分化的甲状腺癌亚型,罕见、侵袭性强,且进展迅速,具有致命性,仅占甲状腺癌的1%-2%。然而,它被认为是最致命的甲状腺癌,其相关死亡占所有甲状腺癌死亡率的38%到50%,中位生存期较差（3-10个月）。在ATC发展的过程中,它能迅速侵入人重要的神经血管和内脏中,这使得ATC治疗具有很大的挑战。到目前为止,还没有一种治疗模式能显著改变这种疾病的进程或预后。因此,急需研究出针对ATC的特定治疗方案。ATC患者预后很差,对传统治疗反应也很差。虽然有些病人可能有反应或病情稳定,但单药化疗治疗并不十分有效,联合放疗和其他药物治疗ATC可能更有效。目前,阿霉素是FDA唯一批准用于ATC的药物。阿霉素,是一种DNA拓扑异构酶Ⅱ抑制剂,属于蒽环类抗癌药物家族,它被用于治疗多种实体及血液学恶性肿瘤。然而,癌细胞对阿霉素敏感性的降低已经成为ATC治疗的主要障碍。目前,癌细胞增殖、自噬、凋亡等在肿瘤对阿霉素敏感性中的作用及其机制已成为研究热点之一。通过调节增殖、自噬等细胞功能来逆转阿霉素耐药性是一种很有前途的治疗策略。深入了解药物敏感性调控机制,开发分子靶向调节剂,将为克服癌症治疗中的阿霉素耐药提供一个有前景的治疗策略。西达本胺（chidamide,CS055/HBI-8000）是中国自主研发的一种新型创新药物,旨在选择性抑制组蛋白去乙酰化酶HDAC1、2、3、10的活性。于2014年12月获得中国食品药品监督管理局（CFDA）批准,西达本胺可用于治疗复发或难治性外周T细胞淋巴瘤（Peripheral T-cell lymphoma,PTCL）。据研究显示,西达本胺对肺癌、胰腺癌、肝癌等多种实体肿瘤以及难治性血液恶性肿瘤均有治疗作用。而西达本胺是否能够治疗ATC、它能否联合阿霉素治疗ATC,以及其潜在的作用分子机制还尚不清楚,研究这些内容这对于ATC有效治疗方法的制定具有重要的意义。本课题为研究西达本胺对ATC发展进程与化疗增敏的影响,首先在体外利用MTT、流式细胞术、划痕实验、Transwell、单丹磺酰尸胺（MDC）荧光染色法检测了西达本胺与阿霉素单独处理以及二者联合处理对ATC细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭、自噬体形成的影响,并利用qRT-PCR和Western blot检测了西达本胺与阿霉素单独处理以及联合处理对ATC细胞中自噬相关基因和蛋白表达的影响;其次,利用8505C细胞移植进行构建ATC移植瘤裸鼠模型,检测了西达本胺与阿霉素单独处理以及二者联合处理对ATC移植瘤生长的影响,之后利用HE染色检测西达本胺与阿霉素单独处理以及二者联合处理对ATC移植瘤组织形态的影响,并利用qRT-PCR、Western blot和免疫组化检测西达本胺与阿霉素单独处理以及二者联合处理对ATC移植瘤中BECN1、Atg5、LC3-Ⅱ、LC3-Ⅰ等自噬相关基因和蛋白表达的影响;此外,为研究西达本胺联合阿霉素对ATC的影响机制,利用Western blot检测了西达本胺与阿霉素单独处理以及二者联合处理对ATC细胞以及ATC移植瘤中PI3K-AKT-mTOR信号通路相关分子表达的影响。本文主要分为三部分:第一部分:西达本胺对阿霉素介导的ATC细胞生物学功能的影响;第二部分:西达本胺对ATC细胞裸鼠成瘤以及阿霉素敏感性的影响;第三部分:西达本胺联合阿霉素对ATC的抑制机制研究。主要内容:第一部分:西达本胺对阿霉素介导的ATC细胞生物学功能的影响方法1.MTT检测西达本胺联合阿霉素对8505C和HTh74细胞增殖的影响。2.流式细胞术检测西达本胺联合阿霉素对8505C和HTh74细胞凋亡的影响。3.划痕实验检测西达本胺联合阿霉素对8505C和HTh74细胞迁移的影响。4.Transwell检测西达本胺联合阿霉素对8505C和HTh74细胞侵袭的影响。5.单丹磺酰尸胺（MDC）荧光染色法观察西达本胺联合阿霉素对8505C和HTh74细胞内自噬体形成的影响。6.qRT-PCR检测西达本胺联合阿霉素对8505C和HTh74细胞中自噬相关基因BECN1和Atg5表达的影响。7.Western blot检测西达本胺联合阿霉素对8505C和HTh74细胞中自噬相关蛋白BECN1、Atg5、LC3-Ⅰ和LC3-Ⅱ表达的影响。结果经阿霉素或西达本胺处理,ATC细胞的增殖、侵袭和迁移均明显受到抑制,凋亡和自噬受到促进;而与阿霉素或西达本胺单独处理组相比,同时用西达本胺和阿霉素处理后ATC细胞增殖、侵袭和迁移受到抑制,凋亡和自噬受到促进的程度又明显增加。第二部分:西达本胺对ATC细胞裸鼠成瘤以及阿霉素敏感性的影响方法1.将8505C细胞注射于裸鼠右肢背部构建ATC移植瘤,对小鼠进行阿霉素或西达本胺处理,定期检测移植瘤体积,待30天后处死裸鼠,检测移植瘤的重量。2.HE染色检测西达本胺联合阿霉素对ATC移植瘤组织形态的影响。3.qRT-PCR检测西达本胺联合阿霉素对ATC移植瘤中BECN1、Atg5 mRNA表达的影响。4.Western blot检测西达本胺联合阿霉素对ATC移植瘤中BECN1、Atg5、LC3-Ⅱ、LC3-Ⅰ蛋白表达的影响。5.免疫组化检测西达本胺联合阿霉素对ATC移植瘤中BECN1、Atg5、LC3-Ⅱ、LC3-Ⅰ蛋白表达的影响。结果1.与对照组相比,经阿霉素或西达本胺处理后,ATC移植瘤生长速度明显减慢,体积和重量明显减小;而与阿霉素或西达本胺单独处理组相比,经阿霉素和西达本胺同时处理后ATC移植瘤体积和重量减小最为明显。2.HE染色结果显示,与对照组相比,阿霉素或西达本胺处理后ATC移植瘤组织恶性程度明显减轻;而与西达本胺或阿霉素单独处理相比,经二者同时处理后移植瘤恶性程度又明显减轻。3.qRT-PCR分析发现,与对照组相比,阿霉素或西达本胺处理组ATC移植瘤中BECN1、Atg5 mRNA表达均明显升高;与西达本胺或阿霉素单独处理相比,经二者同时处理后BECN1、Atg5 mRNA表达又明显升高。4.免疫组化和Western blot检测发现,与对照组相比,阿霉素或西达本胺处理组ATC移植瘤中BECN1、Atg5蛋白表达及LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值均明显升高;与西达本胺或阿霉素单独处理相比,经二者同时处理后BECN1、Atg5蛋白表达及LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ 比值升高程度更明显。第三部分:西达本胺联合阿霉素对ATC的抑制机制研究方法利用Western blot检测西达本胺联合阿霉素对ATC细胞以及ATC移植瘤中PI3K-AKT-mTOR 信号通路相关分子 PI3K、AKT、p-PI3K、p-AKT 和 mTOR 表达的影响。结果在ATC细胞和移植瘤中,经西达本胺或阿霉素处理后,p-PI3K、p-AKT和mTOR蛋白水平明显降低,PI3K和AKT表达无明显变化;与西达本胺或阿霉素单独处理相比,经西达本胺和阿霉素同时处理后,p-PI3K、p-AKT和mTOR蛋白水平降低的程度更明显,而PI3K和AKT表达无明显变化。全文结论西达本胺能够增强阿霉素对ATC中细胞增殖、侵袭、迁移和PI3K-AKT-mTOR信号通路活性的抑制作用,以及对细胞凋亡和自噬的促进作用,进而更有效地抑制ATC的发展。