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目的:通过观察中药复方扩心方及黄芪多糖对与扩张型心肌病相似表型的Tnnt突变斑马鱼模型的干预作用,和黄芪多糖对异丙肾上腺素诱导的H9C2细胞肥大的作用,探讨扩心方及其有效成分黄芪多糖对扩心病的疗效和可能的作用机制。研究方法:1.从整体水平,观察扩心方对转基因斑马鱼(tnnt2a-/-)和(Tg:tnnt2a-/-)心脏的作用。分成Control(cmlc2)组、Model1(tnnt2a-/-)组、Model1+扩心方组、Model2(Tg:tnnt2a-/-)组、Model2+扩心方组。进行生存率统计、观察心率、测量静脉窦-动脉球(SV-BA)的距离、冰冻切片HE染色行病理组织学观察、检测三磷酸腺苷(ATP)水平、超氧化物歧化酶(SOD)水平、丙二醛(MDA)水平、Real time PCR检测Bcl2/Bax、Tnnt2、Caspase3、Caspase9的mRNA的表达。2.从整体水平,观察黄芪多糖对转基因斑马鱼心脏的作用。进行生存率统计、观察心率的变化、测量静脉窦-动脉球(SV-BA)的距离、石蜡切片HE染色观察病理组织学变化、检测三磷酸腺苷(ATP)水平、超氧化物歧化酶(SOD)水平、丙二醛(MDA)水平、Tunel染色观察心肌细胞的凋亡情况、Real time PCR检测Bcl2/Bax、Tnnt2的mRNA的表达情况。3.从细胞水平,观察黄芪多糖对异丙肾上腺素诱导的H9C2细胞的作用。通过CCK8检测细胞的存活率、测量细胞的直径、检测线粒体膜电位的水平、Tunel染色观察心肌细胞的凋亡情况、Western Blot检测Bcl2、Bax、Caspase3的蛋白表达情况。结果:1.扩心方对突变斑马鱼的心脏具有保护作用。可以增加模型1组斑马鱼的生存率(P<0.05),对静脉窦-动脉球(SV-BA)的距离无改善作用(P>0.05),病理显示使突变斑马鱼心脏的排列更为紧密,增加ATP的含量(P<0.05),对超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)的含量没有影响(P>0.05),增加与凋亡相关基因Bcl2/Bax的表达(P<0.05),对Tnnt2、Caspase3、Caspase9的mRNA的表达没有影响(P>0.05)。对模型2组斑马鱼的生存率没有影响(P>0.05),对静脉窦-动脉球(SV-BA)的距离也无影响(P>0.05),病理显示使突变斑马鱼细胞的排列更为紧密,对ATP的含量没有影响(P>0.05),增加超氧化物歧化酶(SOD)的含量(P<0.01)、降低丙二醛(MDA)的含量(P<0.01),增加与凋亡相关基因Bcl2/Bax的表达(P<0.01),对Tnnt2的mRNA的表达没有影响(P>0.05),降低凋亡相关基因Caspase3的mRNA的表达(P<0.01)、降低Caspase9的mRNA的表达(P<0.05)。2.黄芪多糖对突变斑马鱼的心脏也具有一定的保护作用。可以增加模型1组斑马鱼的生存率(P<0.05),不能改善静脉窦-动脉球(SV-BA)的距离(P>0.05),病理显示使突变斑马鱼心脏的排列更为紧密,增加ATP的含量(P<0.05),对超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)的含量没有影响(P>0.05),Tunel染色显示减少心肌细胞的凋亡,对相关基因Bcl2/Bax、Tnnt2的mRNA的表达没有影响(P>0.05)。不能改善模型2组斑马鱼的生存率(P>0.05),对静脉窦-动脉球(SV-BA)的距离也无影响(P>0.05),病理显示使突变斑马鱼细胞的排列更为紧密,对ATP的含量没有影响(P>0.05),增加超氧化物歧化酶(SOD)的含量(P<0.01)、降低丙二醛(MDA)的含量(P<0.01),Tunel染色显示减少心肌细胞的凋亡,增加抗凋亡相关基因Bcl2/Bax的表达(P<0.05),对Tnnt2的mRNA的表达没有影响(P>0.05)。3.黄芪多糖对异丙肾上腺素诱导的心肌细胞肥大也存在一定的保护作用。虽然黄芪多糖不能提高细胞存活率(P>0.05)、不能逆转细胞直径变大(P>0.05),但黄芪多糖干预后,能改善线粒体膜电位,Tunel染色显示凋亡细胞数目减少(P<0.01),Western Blot显示增加Bcl2/Bax的比值(P<0.01),减少凋亡蛋白Caspase3的表达(P<0.05)。结论:1.以中医理论为基础,基于扩心病“本虚标实”的病机,采用益气养阴等治法,发现扩心方对与扩张型心肌病相似表型的Tnnt突变斑马鱼的生存率有改善作用,可能与改善能量代谢、氧化应激系统、减少凋亡相关基因的表达有关。2.筛选扩心方君药黄芪的有效成分,发现黄芪多糖对Tnnt突变斑马鱼仍然具有保护作用,且机制与扩心方相似,虽然保护作用弱于扩心方,但也说明黄芪多糖是扩心方发挥疗效的有效物质之一。3.黄芪多糖对异丙肾上腺素诱导的H9C2心肌细胞具有保护作用,可能与抑制凋亡相关蛋白的表达有关。