【摘 要】
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实验目的:RNA结合基序蛋白3（RNA binding motif protein 3,RBM3）是在动物机体中存在的重要冷应激蛋白,受低温影响其表达量上调,起着保护机体细胞免受低温刺激伤害的作用,但这种保护作用的调控机制还有待于进一步阐明。本研究首先成功构建携带大鼠RBM3基因的过表达慢病毒载体,感染海马神经元以及动物机体,从低温情况下RBM3发挥的保护作用机制进行综合性研究,以期为今后研究RB
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实验目的:RNA结合基序蛋白3（RNA binding motif protein 3,RBM3）是在动物机体中存在的重要冷应激蛋白,受低温影响其表达量上调,起着保护机体细胞免受低温刺激伤害的作用,但这种保护作用的调控机制还有待于进一步阐明。本研究首先成功构建携带大鼠RBM3基因的过表达慢病毒载体,感染海马神经元以及动物机体,从低温情况下RBM3发挥的保护作用机制进行综合性研究,以期为今后研究RBM3在临床亚低温治疗中的机理以及研制畜牧养殖业RBM3抗冷应激制剂提供理论基础。实验方法:（1）RBM3过表达慢病毒载体的构建及验证:从SD大鼠睾丸组织中获取RBM3的cDNA,将其克隆到慢病毒载体LV5质粒当中,采用脂质体法将重组LV5-RBM3表达载体与p Gag/Pol、p Rev、p VSV-G三个质粒共转染到293T细胞,包装产生慢病毒并检测其病毒滴度。（2）离体试验:用成功构建的RBM3过表达慢病毒载体感染SD大鼠海马神经元以及对其进行不同温度亚低温处理,检测神经元细胞凋亡情况,探究RBM3在亚低温情况下对细胞的保护作用机制。（3）在体试验:对小鼠进行慢病毒腹腔注射以及对小鼠进行不同温度、时间点的低温刺激,检测相关氧化还原指标,凋亡指标以及细胞因子的表达水平,探讨在体内复杂环境下RBM3在冷刺激过程中的作用机制。实验结果:（1）成功构建RBM3过表达慢病毒载体;（2）过表达慢病毒载体成功感染海马神经元,最佳的感染MOI值为140:1;（3）离体实验:（1）RBM3 m RNA和蛋白的表达量在过表达实验组以及亚低温实验组都显著地高于对照组（P<0.01,P<0.05）。（2）RBM3过表达实验组以及亚低温实验组神经元凋亡率显著地低于对照组（P<0.01）。（3）神经元中RBM3过表达实验组以及亚低温实验组caspase-3的表达量,bax/bcl-2的比率显著低于对照组（P<0.05,P<0.01）。（4）在体实验:（1）RBM3过表达冷刺激实验组与单纯冷刺激组相比T-AOC,SOD及IL-2,IL-6的变化量显著升高（P<0.05或P<0.01）,而MDA,IL-1的变化量显著降低（P<0.05）。（2）各组中caspase-3均无显著变化（P>0.05）。实验结论:体内体外实验结果表明,RBM3可以有效地避免冷应激情况下所引起的应激损伤,对机体细胞起到保护作用。
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