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目的 检测p53、VEGF（血管内皮生长因子）在大肠癌组织中的表达、光镜下观察新生血管分布、电镜扫描观察血管微细结构，进而探讨p53、VEGF与大肠癌血管生成之间的关系。 方法 采用免疫组化方法和电镜扫描技术对68例大肠癌组织及12例癌旁正常组织的p53、VEGF表达及微血管数目（MVC）和肿瘤新生微血管的生长方式进行研究。实验步骤包括：①免疫组化染色：采用S-P法，将制成的石蜡组织切片常规脱蜡、水洗，加过氧化氢并孵育15分钟，PBS液缓冲、分别对相应抗原进行加热修复，加血清室温孵育20分钟后加一抗室温孵育约1.5小时后，PBS液缓冲、加二抗室温孵育1小时，PBS液缓冲、加辣根过氧化酶复合物室温孵育1小时后DAB显色，镜下观察1-3分钟，苏木素染色，水洗、脱水、透明，中性树胶封固而染色成片；②光镜下观察微血管形态，并计数新生微血管数；③利用电镜扫描技术观察大肠癌新生血管的微细结构并进行摄片；④统计学分析微血管计数所得数据用非参数检验进行统计分析，VEGF、p53和MVC的相关性用卡方检验和秩和检验进行统计学分析。 结果 1．p53、VEGF和MVC在大肠癌组织及癌旁组织中的表达：大肠癌组织及癌旁黏膜组织中的p53阳性表达率分别为55.9％和16.7％，大肠癌组织及癌旁组织的VEGF表达阳性率分别为45.6％和8.3％，p53和VEGF在大肠癌组织中的表达均明显高于癌旁正常组织，两组间差异均有显著意义（χ12=3.92，χ22=5.47，p＜0.05）。大肠癌组织的MVC值（87.4±21.3）高于癌旁组织（36.5士14.2），其差异有统计学意义（u=3.97，p<0.05）。 2.MVC与户3、VEGF表达的关系:户3表达阳性的大肠癌组织其VEGF的阳性率为57 .9%，p53表达阴性的大肠癌组织其VEGF的阳性率为30.0%，前者明显高于后者（x，二4.61，p<0.05），p53及VEGF表达阳性的大肠癌组织其MVC值明显高于p53及VEGF表达阴性者，其差别有显著意义（U=6.43，p< 0.01）。 3.大肠癌新生血管的光镜下所见:（1）弥散式—镜下可见被染成棕红色的血管内皮细胞弥散地分布于肿瘤组织间;（2）套袖式—血管内皮细胞联结成线条状、指套样或筛样包绕肿瘤腺体;同时还观察到有些肿瘤组织可同时出现弥散式和套袖式的血管分布。 4.大肠癌新生血管的电镜下所见:以弥散式生长方式为主的微血管的管壁较厚、凸凹不平、结构疏松，并可观察到有许多大小不等的孔洞;而以套袖式生长方式为主的微血管的管壁较薄、致密平整、连结紧密。 5.p53、VEGF的表达及MVC与大肠癌组织新生血管生长方式的关系:本实验按光镜下观察到的微血管生长方式分为弥散式、套袖式和中间型。p53在各生长方式中的阳性表达率依次为39.5%、巧.8%和44.7%，其差异无显著性意义（才二2.52，p>0.05）; vEGF在各生长方式中的阳性率依次为71 .0%、6.45%和22.6%，VEGF在弥散式生长方式中的表达明显高于其它组（才二6.16，p<0.05）。MVc在弥散式生长方式肿瘤组织中高达xls.6*37.4，与其它方式中表达相比差异显著（xZ=7.70，p<0.05）。讨论 本研究中p53和VEGF在大肠癌组织中的表达率分别为55.9%和45.6%，明显高于癌旁正常组织，与Kang、孟冬娅等国内外学者的报道基本相符，这个结论支持p53和vEGF可以作为肿瘤生物治疗理想靶点的观点。P53表达阳性的大肠癌组织其VEGF的阳性率为57.9%，明显高于p53表达阴性的大肠癌组织（p<0.05），显示户3突变可上调VEGF的表达，促进其合成，并进一步促进肿瘤的微血管生成。 MVC（微血管数）是反映肿瘤微血管生成的客观指标，一直被用作肿瘤侵袭和转移潜能的生物学标志。本研究结果显示卢3、VEGF的表达与MVC关系密切，p53及VEGF表达阳性的大肠癌组织其MVC明显高于阴性者（p<0.01），说明p53突变和vEGF有诱导肿瘤血管生成的作用，这个结论与Takahashi、陈治等的研究结果一致。 另外，本实验还发现，MVC在弥散式生长方式肿瘤组织中高达1 18.6土37 .4，与在其它方式中表达相比差异具有统计学意义（p<0.05）。这表明肿瘤的新生微血管数与血管的生长方式有关，分析其原因可能是在肿瘤微血管形成初期，原发灶周围形成暂时的极度缺氧状态，激活HIFla继而上调vEGF的表达，促进内皮细胞增殖，促使蛋白外渗，为内皮细胞增殖提供基质条件而促进血管形成。 实体瘤的生长和转移与肿瘤血管生成关系密切，研究认为，肿瘤血管形.成受肿瘤细胞和肿瘤间质的免疫细胞分泌的血管生成因子和血管抑制因子调节。VEGF是血管生成因子中最重要的，它是一种糖基化分泌性多肤因子，可直接作用于血管内皮细胞，刺激其有丝分裂的发生，从而促进新生血管的生长，也可通过增加血管通透性，使血浆蛋白外渗，为血管内皮细胞迁移及肿瘤细胞的转移提供”平台”。而这样的基质”平台”的伸展并非盲目，相反是接受一定”指令”的，就象上述有些学者研究的那样肿瘤血管生成受多种因子的影响，其中Engels研究认为VEGF不仅是一种重要的血管生成调节因子，而且可能与新生血管的生长方式相关，值得一提的是我们在光镜下（x400）可以观察到不同生长方?