弓形虫(Toxoplasma gondii)是在温血动物和人类中普遍存在的一种机会性致病寄生虫,除感染终末宿主猫及猫科动物以外,还可以感染犬、马、鸟类等中间宿主,可导致感染动物母畜流产、死胎、畸形胎等。此外,人类也可感染弓形虫,免疫力降低的人群可导致严重的疾病。犬新孢子虫(Neospora caninum)是一种胞内原生寄生虫,能够感染许多家畜和野生动物,目前确认的终末宿主只有犬及犬科动物,感染犬新孢子虫的牲畜常引起胎儿流产及心脏、脑、肝等组织炎症。犬新孢子虫对牛可造成严重的危害,全球的奶牛流产病至少有40%是由犬新孢子虫感染引起。尽管有许多动物可以作为这两种寄生虫的中间宿主,但很少有野鸟感染弓形虫及犬新孢子虫的报道。本研究从中国湖南省益阳市随机收集了239份野鸟样品,包括38份栗鹀,44份树鹨,26份黄胸鹀和131份树麻雀,针对野鸟脑组织DNA进行了弓形虫和犬新孢子虫的分子感染调查及弓形虫基因型研究:(1)弓形虫的感染情况调查:本研究提取脑组织基因组DNA,使用半巢式PCR的方法进行B1基因检测。本研究结果表明,239份野鸟样品中,弓形虫为阳性的有13份(5.5%)。(2)犬新孢子虫的感染情况调查:本研究以结合犬新孢子虫核糖体区Nc-5编码基因和核糖体内转录间隔区(ITS-1)为分子标记对野鸟脑组织DNA进行检测。本研究结果显示,在239份野鸟中,犬新孢子虫的感染率为15.5%(37/239),其中树鹨为20.5%(9/44),树麻雀为18.3%(24/131),栗鹀为7.9%(3/38),黄胸鹀为3.8%(1/26)。基于ITS-1序列的系统发育关系表明,不同寄主和地理来源的犬新孢子虫分离株具有遗传多样性。(3)弓形虫的基因分型研究:本实验使用遗传标记对B1基因检测得出的13份弓形虫阳性样本再进行基因分型,遗传标记包括SAG1,SAG2(5’+3’SAG2,alter.SAG2),SAG3,BTUB,GRA6,c22-8,c29-2,L358,PK1,和Apico。结果显示,在13份弓形虫阳性样品中,3份样品完成所有位点的分型,鉴定为弓形虫ToxoDB#10。本研究结果表明,野鸟是弓形虫及犬新孢子虫重要的中间宿主,对人类健康构成了潜在的风险。本研究结果不仅丰富了弓形虫基因型地区分布特征信息,也为弓形虫病和犬新孢子虫病的防治和控制提供了数据支撑。