粗毛纤孔菌(Inonptus hispidus)是一种喜欢生活在水曲柳、桑树等落叶树上的寄生真菌,该菌在国内主要分布于北京、河北、黑龙江等北温带地区。在东北地区和新疆已被用作治疗消化不良、癌症和糖尿病等疾病。粗毛纤孔菌中不仅含有大量抗菌,抗氧化和抗炎活性的黄褐色色素,还含有一种重要的活性成分三萜类化合物。因此本试验以粗毛纤孔菌为原料,首先研究了复合诱导剂及浓度对粗毛纤孔菌菌丝体中总三萜生物合成量及在代谢过程中对超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化氢酶(CAT)活性的影响,然后将通过最佳复合诱导剂诱导的粗毛纤孔菌菌丝体和水曲柳上采集的粗毛纤孔菌子实体总三萜进行纯化,最后研究了总三萜的体外降血脂能力,研究结果如下:本试验以菌丝体干重及胞内总三萜含量为考察指标,研究茉莉酸甲酯(MeJA)、水杨酸(SA)、油酸、Cu2+复合后对粗毛纤孔菌菌丝体量及胞内总三萜含量的影响,以确定最佳的复合诱导剂及浓度。并且在筛选得到的最佳条件下研究其对CAT、SOD活性影响。研究发现发酵前(第0 d)添加2%油酸和第6 d添加100 μmol/L MeJA时菌丝体量和胞内总三萜含量最多,分别为3.98 g、85.17 mg/g。2%油酸和100μmol/L MeJA可以促进SOD和CAT活性的提高,其中SOD的活性最大,第2 d时含有2%油酸培养瓶中粗毛纤孔菌的SOD活性可以达到78.70 U/mgprot,随着天数的增加 SOD活性降低。第6 d加入100 μmol/L MeJA后空白和含有2%油酸的发酵瓶中SOD活性又增加,第7 d时SOD活力最大分别为59.70、68.69 U/mgprot。本试验以粗毛纤孔菌子实体及菌丝体为原材料,分析了有机溶剂、高径比(硅胶高:硅胶柱直径)、上样量和硅胶量质量比、洗脱体系和洗脱剂比例对粗毛纤孔菌总三萜纯度的影响。并且在最佳的纯化条件下与其它纯化方法作对比。同时利用红外光谱分析了经萃取和硅胶纯化后的粗毛纤孔菌菌丝体和子实体总三萜结构。研究发现高径比55:22、上样量和硅胶量质量比4:80、洗脱体系为丙酮:石油醚、洗脱剂比例3:1时,菌丝体和子实体经乙酸乙酯萃取后的总三萜纯度显著提高为65.35、42.32%,分别是粗提物的4.26、4.60倍。该纯化技术与其他纯化技术相比菌丝体和子实体总三萜纯度均最大。红外光谱分析显示,菌丝体和子实体总三萜存在-CH2、-CH3、-S-O等官能团的差异,但都符合三萜类物质的特征结构。本试验通过粗毛纤孔菌总三萜的体外胆酸盐结合能力分析、HepG2细胞高脂模型的建立和总三萜对HepG2细胞存活率、脂质含量和血脂四项的影响,来考察粗毛纤孔菌总三萜的体外降血脂能力。研究发现菌丝体纯化后的总三萜胆酸钠、甘氨胆酸钠和牛磺胆酸钠最大分别为1.14、1.78、2.06 μmol/100mg,是粗提总三萜的1.56、1.73、1.72倍。油酸浓度400 μmol/L、造模时间24 h时HepG2细胞的脂质含量最高是空白组的2.05倍。总三萜能够很好的降低HepG2细胞内脂质含量、总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)的含量和提高高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)的含量。总三萜浓度为250μg/mL时,脂质含量从空白的2.05倍变成1.21倍,下降了 40.98%。细胞内TC含量为0.75 mmol/gprot,对细胞内TC的清除率达到41.86%。细胞内TG含量为0.62 mmol/gprot,对细胞内TG的清除率达到44.44%。细胞内LDL-C含量为0.89 mmol/gprot,对细胞内LDL-C的清除率达到44.02%。细胞内HDL-C含量为1.18 mmol/gprot,对细胞内HDL-C的增长率达到57.33%。