禽流感是由甲型流感病毒引起的人畜共患疾病,近年来甲型流感病毒的阶段性爆发,造成了人类伤亡的同时也重创了家禽养殖业。甲型流感病毒属正粘病毒科,是含8个节段基因组的负链RNA病毒。其NS节段编码的非结构蛋白NS1是一种多功能蛋白,参与病毒感染期间的多个过程,包括抑制宿主的免疫反应、调节vRNA的合成、促进病毒mRNA的剪接与翻译、调节病毒复制循环等。本研究主要对NS1对病毒基因组M节段的调控机制进行了探索,发现在NS1过表达的情况下,M节段剪接产生的M2 mRNA水平显著增强,而不依赖剪接生成的M1 mRNA水平无显著性变化,初步表明NS1能促进病毒基因组M节段的剪接。NS1大部分功能主要通过蛋白-蛋白或者蛋白-RNA相互作用来实现,其在病毒感染早期就大量存在于宿主细胞中,病毒mRNA剪接需要依赖宿主细胞中的剪接因子。因此我们推测NS1可能与宿主某些剪接因子存在相互作用而增强M节段的剪接。本研究采用串联亲和层析,结合LC-MS/MS质谱检测,找到多个与NS1或者NEP相互作用的宿主蛋白,包括YWHAB、RPL24、YBX1、PABPC4等。并通过免疫共沉淀实验确定剪接因子YBX1与NS1存在直接相互作用。免疫荧光的定位研究表明,NS1与YBX1的互作可能通过改变YBX1在细胞内的定位而发挥功能。对YBX1蛋白进行敲降后,M1与M2在mRNA水平上均存在一定程度的降低,其中M2的蛋白水平急剧下降。这初步证明了NS1与YBX1的相互作用能影响病毒基因组M节段的表达。通过截断蛋白结构域与免疫共沉淀技术,证明了YBX1与NS1相互作用的关键结构域是冷休克结构域。综上所述,本研究通过实验找到了参与NS1调控M节段表达的剪接因子YBX1。证明了YBX1在NS1调控M节段表达的过程中发挥重要的功能,并且发挥YBX1这一功能的关键结构域是冷休克结构域。阐明NS1与YBX1的相互作用及其对M节段剪接的影响,有助于我们更清楚地了解病毒的生活史,为以NS1为靶点的药物和疫苗开发提供一些思路。