【摘 要】
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目的:（1）利用正交实验设计法对超声声强、微泡/细胞悬液体积比、占空比、辐照时间进行参数优化,确定不同超声参数对膀胱癌T24细胞膜通透性的影响,为超声联合微泡基因传染膀胱癌细胞奠定实验基础。（2）采用超声联合微泡介导p EGFP-N1-wt-p53基因转染膀胱癌T24细胞,探讨其转染效率及细胞凋亡情况。方法:（1）设定超声声强、微泡/细胞悬液体积比、占空比、辐照时间为正交试验设计的4个因素,每个因
【基金项目】
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贵州省科技厅联合基金（黔科合LH字[2016]7494号）；
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目的:（1）利用正交实验设计法对超声声强、微泡/细胞悬液体积比、占空比、辐照时间进行参数优化,确定不同超声参数对膀胱癌T24细胞膜通透性的影响,为超声联合微泡基因传染膀胱癌细胞奠定实验基础。（2）采用超声联合微泡介导p EGFP-N1-wt-p53基因转染膀胱癌T24细胞,探讨其转染效率及细胞凋亡情况。方法:（1）设定超声声强、微泡/细胞悬液体积比、占空比、辐照时间为正交试验设计的4个因素,每个因素分别设置4个水平,即超声声强:0.4 W/cm~2、0.6 W/cm~2、0.8 W/cm~2、1.0 W/cm~2,微泡/细胞悬液体积比:10%、20%、30%、40%,占空比:10%、20%、30%、40%,辐照时间:1 min、2 min、3 min、4 min,按照4因素4水平生成正交试验设计表,共16个实验组,每组按照正交试验设计表超声参数进行超声辐照,辐照后采用荧光显微镜检测FD40S染色阳性率。（2）利用获得最佳优化超声参数（超声声强:0.6 W/cm~2、辐照时间1 min、占空比40%、微泡/细胞悬液体积10%）介导p EGFP-N1-wt-p53基因转染体外膀胱癌T24细胞;实验分为6个组:空白对照组（Control组）、超声联合微泡组（US+MB组）、脂质体组（Lip2000组）、超声联合脂质体组（US+Lip2000组）、微泡联合脂质体组（MB+Lip2000组）、超声和微泡联合脂质体组（US+MB+Lip2000组）,辐照后培养24小时用荧光显微镜观察膀胱癌T24细胞基因转染情况,应用高倍光学显微镜观察细胞变化情况,并利用流式细胞仪检测基因转染率及细胞凋亡率。结果:（1）不同因素对细胞膜通透性影响程度由强至弱依次为:超声声强＞微泡/细胞悬液体积＞占空比＞辐照时间;各因素不同水平的影响程度由强至弱依次为:超声声强:0.6 W/cm~2、0.4 W/cm~2、1.0 W/cm~2、0.8 W/cm~2;辐照时间:1 min、2 min、3 min、4 min;占空比:40%、10%、20%、30%;微泡/细胞悬液体积:10%、20%、30%、40%。（2）p EGFP-N1-wt-p53基因转染膀胱癌T24细胞,US+MB+Lip2000组与Control组、US+MB组、Lip2000组、US+Lip2000组、MB+Lip2000组相比,基因转染率显著增加（P＜0.01）;与Lip2000组相比,US+Lip2000组基因转染率增加（P＜0.01）。US+MB+Lip2000组与Control组、US+MB组、Lip2000组、US+Lip2000组、MB+Lip2000组相比,细胞凋亡率显著增加（P＜0.01）;与Lip2000组相比,MB+Lip2000组、US+Lip2000组细胞凋亡率增加（P＜0.01）。结论:（1）不同超声参数对膀胱癌T24细胞膜通透性影响不同,其最佳参数优化组合为:超声声强:0.6 W/cm~2、辐照时间1 min、占空比40%、微泡/细胞悬液体积10%。（2）超声与微泡联合脂质体能有效提高p EGFP-N1-wt-p53基因转染膀胱癌T24细胞的效率,从而促进膀胱癌T24细胞凋亡,为膀胱癌的治疗奠定基础。
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