目前,由天然蛋白质酶解所得抗氧化肽因其结构相对简单、活性强、易于机体吸收、安全无毒副作用等特点而备受青睐。黑藻属水鳖科黑藻植物,其蛋白质含量较高,是制备抗氧化肽的良好原料。但黑藻蛋白并没有得到充分的利用,高值资源化程度较低。目前,利用黑藻蛋白制备抗氧化肽鲜有报道。因此,本研究以黑藻蛋白为原料,利用酶法水解黑藻蛋白、制备黑藻抗氧化肽,对黑藻抗氧化肽进行分离纯化以及氨基酸序列测定,并研究其体外和细胞内抗氧化活性,以期为黑藻蛋白开发和高值资源化提供依据。具体研究内容如下:1)首先通过测定胃蛋白酶、胰蛋白酶、碱性蛋白酶和木瓜蛋白酶酶解物的水解度和抗氧化活性,筛选酶解黑藻蛋白的最佳蛋白酶,然后在单因素试验基础上响应面法优化黑藻蛋白水解条件。试验结果:胰蛋白酶为水解黑藻蛋白的最佳蛋白酶,胰蛋白酶酶解黑藻蛋白的最优条件为:酶底比8.6%、时间5.9 h、酶解p H值7.3。最优条件下制备的酶解物对ABTS、DPPH、超氧阴离子和羟基自由基四种自由基的清除率分别为65.9%、40.1%、50.1%、25.3%。2)黑藻胰蛋白酶酶解物经超滤、Sephadex G-25凝胶色谱柱、半制备反向高效液相分离纯化,所得D-3组分（1000μg/m L）对ABTS、DPPH、超氧阴离子和羟基自由基四种自由基的清除率最高,分别为96.03%、57.32%、58.25%和40.38%。根据D-3组分氨基酸序列鉴定结果筛选理论上抗氧化活性强的2条多肽TCLGER和TCLGPK加以合成,经测定TCLGER和TCLGPK两条多肽的抗氧化活性均较高。3)建立HepG2细胞的氧化应激模型,经试验确定采用0.8 mmol/L H2O2。经不同浓度的多肽TCLGER和TCLGPK干预处理后,氧化损伤的Hep G2细胞的存活率显著增加,凋亡率显著减少,ROS含量显著降低,MDA含量显著减少,SOD酶活力、CAT酶活力、GSH-Px酶活力显著增加。经1 mg/m L TCLGER和TCLGPK干预处理的受损细胞存活存活率为别93.51%和95.68%,凋亡率分别为2.33%和2.03%,MDA含量分别为2.9和2.4 U/mg prot,胞内ROS相对荧光强度分别为40156 a.u.和46455 a.u.,SOD酶活力分为95.97 U/mg prot和98.31 U/mg prot;CAT酶活力分为5.87 U/mg prot和6.24 U/mg prot;GSH-Px酶活力分为1.23U/mg prot和1.01 U/mg prot。