论文部分内容阅读
目的:宫颈癌是最常见的女性生殖系统恶性肿瘤之一。近年来,由于人们现代生活结构及环境的改变等诸多因素,宫颈癌发病率表现出逐年上升趋势。LETMD1又名人宫颈癌基因(HCCR),大量研究表明LETMD1与多种肿瘤的发生发展相关,在肿瘤标志物方面也扮演着重要角色,其作为一个癌基因被证实在宫颈癌及宫颈癌细胞系中均有过度表达,但具体调控机制尚未明确。MicroRNA(miRNA)是一类长度约为22个核苷酸的小型非编码RNA,其广泛存在于真核生物中,并在多种生理病理过程中发挥着不可忽视的作用。MiR-494在人视网膜母细胞瘤中被首次发现,目前越来越多的研究发现miR-494广泛参与多种恶性肿瘤的发生发展过程,关于miR-494对宫颈癌发生发展的影响虽已有少量研究报道,但其潜在机制仍需要进一步探索研究。本研究利用生物信息学分析、RT-qPCR、Western blot、双荧光素酶实验及细胞功能实验等,探讨靶向于LETMD1的miR-494在宫颈癌发病机制中的作用。方法:1、首先我们利用RT-qPCR和Western-blot检测30例宫颈癌组织及30例正常宫颈组织中miR-494和LETMD1的含量,分析二者之间的相关性及其与宫颈癌患者临床病理特征的关系;2、将HeLa细胞分别转染miR-494 mimics和miR-494 inhibitor及其各自阴性对照,并检测转染细胞中miR-494与LETMD1的表达情况;3、利用生物信息学技术预测miR-494与LETMD1的靶向关系,并进一步通过双荧光素酶报告基因实验证实两者间的靶向性调控;4、细胞克隆形成实验检测过表达及降表达miR-494对HeLa细胞增殖的影响;Transwell实验检测过表达及降表达miR-494对HeLa细胞迁移和侵袭的影响。所有数据均采用SPSS 20.0统计软件进行单因素方差分析(ANOVA),以P<0.05表示差异具有统计学意义。结果:1.与正常宫颈组织相比,miR-494在宫颈癌组织中表达明显降低。LETMD1在宫颈癌组织中表达明显升高,两者表达呈明显负相关(P<0.05),且miR-494的含量与肿瘤患者FIGO分期呈明显负相关(P<0.05)。2.对比转染mimics NC,转染miRNA-494 mimics时LETMD1mRNA及蛋白水平明显下降(P<0.05);对比转染inhibitor NC,转染miRNA-494 inhibitor时LETMD1 mRNA及蛋白水平明显升高(P<0.05)。3.生物信息学预测LETMD1为miR-494的靶基因,双荧光素酶报告基因实验进一步证实miR-494直接作用于LETMD1 mRNA的3’UTR。4.细胞克隆形成试验结果显示过表达miR-494可抑制HeLa细胞的增殖(P<0.05),Transwell实验证实过表达miR-494可抑制HeLa细胞的迁移和侵袭(P<0.05)。结论:宫颈癌患者中,miR-494表达与患者FIGO分期明显相关,miR-494可能通过靶向作用LETMD1进而抑制宫颈癌细胞的增殖、迁移和侵袭。