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目的:通过皮下接种构造ACHN人肾细胞腺癌移植瘤Balb/c裸鼠模型,探究舒尼替尼(Sunitinib,SU)时辰给药的药效学及药动学特点,并从时辰基因、代谢酶等多个方面探究其可能的药效作用机制。方法:1.建立裸鼠肾癌模型:将4周龄的Balb/c裸鼠置于严格的明暗环境中适应性饲养两周,将培养好的ACHN人肾细胞腺癌细胞于裸鼠右上肢皮下注射,建立Balb/c裸鼠移植瘤模型。2.药效学研究的随机分组:将裸鼠模型随机分为4:00、8:00、12:00、16:00、20:00、24:00六个时辰组,每个时辰组又随机分为舒尼替尼给药组和模型组。3.药效学研究的时辰给药及检测指标:舒尼替尼给药组分别在对应的六个时辰点灌胃给予16.25mg·kg-1舒尼替尼溶液0.2m L,模型组则在同样的时辰点给以等量的CB(Citrate buffer,柠檬酸盐缓冲液,PH=4.5)。在给药期间每三天对肿瘤的长短径进行一次测量以计算其体积,根据其体积变化趋势绘制出肿瘤体积生长曲线。至第21天则分别于相应时辰点处死裸鼠,剥离瘤体称重并制作病理切片以比较各组肿瘤的病理形态。4.药动学研究的随机分组:将裸鼠模型随机分为4:00、8:00、12:00、16:00、20:00、24:00六个时辰组,每个时辰组又分为舒尼替尼给药组和模型组。每个给药组包括15 min、30 min、1h、3h、5 h、7 h、9 h、14 h、19 h、24 h共10个取血点。每个时辰组设置正常裸鼠作为空白对照组。5.药动学研究的时辰给药及检测指标:给药组于六个时辰点分别灌胃给以舒尼替尼16.25mg·kg-1,并于给药后15 min、30 min、1h、3h、5 h、7 h、9 h、14 h、19 h、24 h摘眼球取血0.5m L,离心取血浆置-80℃保存,采用HPLC-MS/MS(high-performance liquid chromatography coupled with tandem mass spectrometry,高效液相色谱法联合质谱)的方法测定不同时辰点舒尼替尼及其主要活性代谢物N-去乙基舒尼替尼(SU12662)的血药浓度,并用Win Nonlin 6.3计算各时辰点的药动学参数。取血后迅速处死裸鼠,并立即取肝脏于-80℃冷冻保存。6.相关基因表达水平的检测:从肝组织中提取总RNA采用q RT-PCR(Quantificational Real Time-PCR,实时荧光定量PCR)检测cyp3a11(cytochrome P450 enzyme 3a11,细胞色素P450酶3a11)、cyp3a13、Bmal-1(brain and muscle arnt-like protein-1,时辰基因编码芳香烃受体核转运样蛋白)、Clock(circadian locomotor output cycles kaput,生物钟循环输出蛋白)及时辰基因的作用位点Dbp(D site-binding protein,D-位点结合蛋白)的表达。结果:1.舒尼替尼在荷瘤裸鼠体内的时辰药效学具有昼夜节律性,与模型组相比,各时辰给药组的肿瘤体积增长速度均有所减慢,肿瘤重量也有不同的减轻。16:00组的肿瘤生长曲线坡势陡直,与其他五个给药组相较,肿瘤体积增长迅速,抑瘤率最低;8:00、12:00给药组与16:00及20:00给药组相比,肿瘤体积生长缓慢,抑瘤率高,有显著性差异(p<0.05),其中8:00给药组肿瘤受抑制情况最为明显。病理切片结果显示,16:00及20:00给药组肿瘤组织细胞排列基本无间隙,边界较为清楚,肿瘤坏死量少,炎性细胞浸润情况轻微;8:00及12:00给药组中大量的肿瘤细胞是坏死的,表现出严重的炎性细胞浸润和血管破裂出血。2.舒尼替尼在荷瘤裸鼠体内的时辰药动学具有昼夜节律性,相比其他各时辰给药组,16:00与20:00给药组AUC0-24h较低,清除率高;8:00及12:00给药组裸鼠体内总药物具有更高的AUC0-24h、MRT0-24h和更低的CL/F,在体内驻留时间长,血药浓度高,与16:00给药组相比具有统计学差异(p<0.05)。与药效学研究结果相一致。3.代谢酶基因cyp3a11、cyp3a13及时辰基因Bmal-1、Clock、Dbp在荷肾癌裸鼠肝脏组织中的表达显示出显著的昼夜节律性。模型组代谢酶基因cyp3a11、时辰基因Bmal-1在12:00至20:00时间范围内表达量高,在16:00表达最高,达到峰值;cyp3a13及Clock表达量自8:00起呈现不断上升的趋势,在20:00至24:00时间段内坡度最大,增长速率最为迅速。结合位点蛋白Dbp在16:00、24:00均有较高程度的表达。在不同的时间点给予舒尼替尼后,16:00组Bmal-1、cyp3a11总体表达量最高;24:00组Clock、Dbp及cyp3a13总体表达量最高,其中Clock及cyp3a13在20:00组也有较高的表达。时辰基因与代谢酶基因的整体表达趋势具有一致性。结论:舒尼替尼在荷瘤裸鼠体内的时辰药理学具有昼夜节律性,在明早期(8:00及12:00)给药时,肿瘤生长缓慢,抑瘤率高,抑瘤效果最好,体内总药物清除率低,在体内的驻留时间长,具有更高的血药浓度。作用机制可能为时辰基因通过作用于Dbp直接调控代谢酶的表达,以影响药物在裸鼠体内代谢的速率,使得舒尼替尼的药动学特点呈现昼夜节律性,亦对药效学产生影响。