本文以质粒pBLAST49-hVEGF为模板，PCR扩增出人VEGF-165全长cDNA序列(nt 1-498)，以及其5’-端(nt 1-300)和3’-端(nt 300-498)cDNA序列，插入到His或GST融合蛋白表达载体pET-32a或pGEX-2T中，在大肠埃希菌Rosetta Gami(DE3)、BL21(DE3)或BL21(DE3)pLysS中诱导蛋白表达。优化蛋白表达条件，获得可溶性融合蛋白，通过亲和层析柱Ni-NTA Agarose和Glutathoine Sepharose 4B将表达蛋白进行纯化。SDS-PAGE显示所表达的His-Trx-VEGF、His-Trx-VEGF1-100及GST-VEGF100-165融合蛋白相对分子质量分别约为38 KD、31 KD及33 KD。Western blot检测证实所纯化的三种蛋白均可与VEGF特异性抗体发生免疫反应。以纯化的VEGF全长融合蛋白His-Trx-VEGF为抗原多次免疫实验用兔和小鼠，分别制备兔源和鼠源抗血清。间接ELISA检测发现，所制备的兔抗血清及小鼠抗血清与纯化的His-Trx-VEGF蛋白的反应效价分别为1∶960,000及1∶512,000。Western blot实验显示，所制备的两种抗血清均可有效地识别三种原核表达的VEGF重组蛋白，以及昆虫细胞表达的VEGF-121蛋白。利用纯化后的抗血清建立了VEGF双抗体夹心ELISA检测方法，该方法的线性检测范围为0.625～320ng/ml，复相关系数的平方R<2>=0.991。利用该方法对229份正常人及291份肝癌患者血清中的VEGF进行了检测，结果发现肝癌患者血清中VEGF的含量高于正常人群，具有统计学差异。本研究中建立的双抗体夹心ELISA方法可用于血清VEGF的检测，对血清样本的检测提示血清VEGF的异常高水平可能与肝细胞癌的发生发展有关，为建立以VEGF为检测指标的肝癌患者转移复发筛查方法提供了科学依据和实验基础。