血小板生成素（TPO）是一种十分重要的造血细胞生长和发育的调控因子，利用转基因技术生产血小板生成素，可以为临床上提供治疗血小板减少症等血液疾病的药用蛋白。 对于转基因大动物技术上的研究，首先要解决的是能在体内高效表达的、安全的、有限传代的表达载体。本文的研究目的就是：利用未发表的人类免疫缺陷性病毒(HIV-1)研究成果，开发具有知识产权的、安全的、高表达的核供体载体。 主要采用两种途径：一种是构建包含高表达元件的质粒载体。将慢病毒载体研究中发现的高表达元件—Leader、RRE、WRE构建到包含TPO外源基因的质粒载体中，将该质粒载体与PLP2（负责表达Rev蛋白的质粒）共转染HC-11细胞，利用Rev蛋白与Leader、RRE元件的相互作用，提高目的基因的RNA转录本，以期达到高表达的目的。在此基础上，将上述表达载体DNA注射到泌乳期母鼠乳腺组织中，通过RT-PCR技术，观察到其TPO mRNA转录水平要高于对照小鼠。从而，分别在细胞和个体水平证明我们的方法有效。 本部分实验结果显示，病毒高表达相关元件能与Rev蛋白相互作用，提高TPO基因RNA转录水平及蛋白表达水平；同时发现，该载体中存在着影响TPO表达的其它因素，需要进一步优化。 另一种途径是利用慢病毒载体有效感染宿主细胞的特性，通过Gene trap，寻找导入适于高效表达的环境，并引用自杀机制，将病毒元件自删除，使之达到高效表达、有限传代和安全的核供体载体的目的。 本部分实验中，构建了包含GFP报告基因、Cre-loxP系统和外源基因TPO的病毒载体，并在细胞水平对载体进行了验证。瞬时转染结果表明，载体能在细胞内正常转录目的基因RNA,但在病毒感染细胞过程中，GFP报告基因作用没有按照预期发挥，可能与载体在病毒包装过程中发生困难有关。