目的:筛选耐药结核分枝杆菌血清学特异分子标志物并体外克隆、表达及纯化Rv0350目的蛋白。方法:收集2011年到2015年就诊遵义医学院附属医院结核病患者及健康体检者血清标本,与结核蛋白芯片杂交筛选特异性蛋白;结合前期试验筛选出的特异性蛋白,组合制作成蛋白小芯片,再收集血清标本与小芯片杂交,进一步筛选出耐药结核病候选标志物。设计目的基因引物,行PCR扩增目的基因,用pET28a与目的基因构建重组质粒,然后转染至BL21(DE3)感受态细胞,IPTG体外诱导目的蛋白,利用镍亲和层析获取纯化的重组蛋白。结果:初次筛选出100个特异性蛋白,第二次杂交筛选出了8个与耐药相关的抗原,分别为Rv0350、Rv0363c、Rv2396、Rv1100、Rv3509c、Rv3653、Rv0865和Rv2031c,其组合诊断耐药结核病的特异度、灵敏度分别为80.4%、80%。我们已经申请一项发明专利(申请号CN201610089177.2)。体外成功克隆、表达和纯化Rv0350蛋白。结论:成功筛选出8个与耐药相关的结核分枝杆菌特异抗原,其中Rv0350诊断特异性较好。利用分子生物学技术可成功获得纯化的结核分枝杆菌Rv0350抗原,为耐药结核病检测试剂盒的研发奠定了基础。