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目的胃癌在我国仍居消化道恶性肿瘤发病率的前列,是世界上死亡率较高的恶性肿瘤,目前胃癌的治疗方法很多,但疗效不能令人满意。因此,从分子水平揭示胃癌的发生发展的机制,有助于解决手术和放化疗等传统治疗方法的缺陷,为恶性肿瘤的治疗提供新的方向。上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition, EMT)是上皮细胞通过特定的程序转化为间质细胞的生物学过程。在胚胎发育过程中,上皮-间质转化能促进组织重塑,还可以促进创伤的愈合。与肿瘤的侵袭、转移和凋亡有密切的关系。组织或器官发生EMT后,上皮细胞标记物E-钙粘蛋白(E-cadherin)等表达下调,间叶表型标记物N-钙粘蛋白(N-cadherin)等表达上调。明确EMT在胃癌发病中的作用,为胃癌的治疗提供依据。微小RNA (microRNA, miRNA)是一类广泛存在于动植物的内源性小分子非编码RNA。miRNAs通常与靶mRNAs的3’非翻译区(3’-untranslated region,3’-UTR)互补结合,在转录后水平抑制靶基因的表达。miRNAs调节细胞增殖、凋亡、分化以及迁移等重要的生物。miRNA的表达和代谢异常与多种疾病密切相关,miRNA应用于恶性肿瘤的诊断和治疗成为研究的热点。方法本课题从三部进行：第一部分：分别采用原位杂交检测64例不同级别胃癌组织和10例正常胃粘膜组织miR-200a、miR-200b和miR-200c的表达。第二部分：免疫组化检测64例不同级别胃癌组织和10例正常胃粘膜组织中EMT相关蛋白ZEB1/ZEB2、E-cadherin、N-cadern、β-catenin、Twist和Snail2的表达。并比较miR-200a的表达与EMT相关蛋白ZEB1/ZEB2、E-cadherin、 N-caderin和β-catenin等表达的关系。体外将miR-200a mimics及阴性对照scramble通过Lipofectamine2000转染胃腺癌细胞系SGC7901,通过共聚焦免疫荧光的方法检测三组ZEB1、ZEB2、E-cadherin、N-cadherin、β-catenin等表达变化。分析miR-200a调控EMT的机制。第三部分：体内实验则通过建立裸鼠皮下胃癌动物模型,将裸鼠分为三组,control组、scramble组、miR-200a组,分别将瘤内注射oligofectamine和Lipofectamine2000的混合物,动态观察肿瘤生长状况,免疫组化分别检测三组EMT相关蛋白ZEB1/ZEB2、E-cadherin、N-caderin、β-catenin等的表达变化。结果第一部分：原位杂交结果显示,miR-200a、miR-200b和miR-200c在胃腺癌的表达明显低于正常胃粘膜,随着病理级别的增高,miR-200a、miR-200b和miR-200c的表达逐渐下调。第二部分：免疫组化结果显示,ZEB1/ZEB2、N-cadherin、β-catenirn、Twist和Snail在胃癌中的表达明显高于正常胃粘膜,E-cadherin的表达则低于正常胃粘膜。随着病理级别的增高,ZEB1/ZEB2、N-cadherin、β-catenin、Twist和Snail2的表达逐渐增高,E-cadherin的表达逐渐降低。免疫荧光结果显示,与在control组和scramble组比较,ZEB1/ZEB2、N-cadherin、β-catenin、Twist和Snail2在control组和scramble组中的表达明显高于miR-200a组,E-cadherin在control组和scramble组中的表达明显低于miR-200a组。第三部分：成功建立SCG7901胃癌裸鼠皮下荷瘤模型后,每4天测量一次肿瘤体积,较control组和scramble组,miR-200a组肿瘤生长缓慢,应用免疫组化法检测三组肿瘤标本,发现ZEB1/ZEB2、N-cadherin、β-cateninTwist和Snail2在control组和scramble组中的表达明显高于miR-200a组,E-cadherin在control组和scramble组中的表达明显低于miR-200a组。体内外结果一致。结论1.在胃癌中,miR-200a表达降低,EMT相关蛋白N-cadherin,β-catenin等表达增加,E-cadherin表达减少,激活wnt/β-catenin信号通路。2. miR-200a转染SGC7901后,能够有效增加miR-200a的表达,抑制EMT的可能机制是可能机制是miR-200a靶向于ZEB1/ZEB2,游离β-catenin降低,抑制wnt/p-catenin信号通路。3.裸鼠皮下荷瘤模型应用miR-200a治疗,能够抑制肿瘤的生长和EMT,可能机制是miR-200a靶向于ZEB1/ZEB2,游离β-catenin降低,抑制wnt/β-catenin信号通路。体内外结果一致。