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灵芝孢子油为灵芝孢子粉经干燥、破壁、超临界二氧化碳萃取工艺制得的提取物,目前灵芝孢子油的市售产品主打提高免疫及抗肿瘤的作用,药理实验研究也表明灵芝孢子油具有抗肿瘤、提高免疫、保肝护肝、抗氧化等活性。但是灵芝中可作为其有效成分的三萜及多糖类在灵芝孢子油中含量较低,无法对灵芝孢子油的品质作出科学有效的评价,因此寻找灵芝孢子油的有效成分对灵芝孢子油质量控制的研究至关重要。本文拟从灵芝孢子油的不皂化物(主要为甾体类)成分入手研究灵芝孢子油的活性成分,主要研究内容分为以下几个方面：一、灵芝孢子油皂化条件考察采用单因素实验分别考察灵芝孢子油皂化碱浓度、皂化碱量、皂化时间、皂化温度,结合实验结果及实际可操作性,确定其皂化方法为皂化碱浓度lmol/L,每克灵芝孢子油皂化碱量0.22g,皂化时间1.5h,皂化温度80℃。二、灵芝孢子油不皂化物的分离纯化及结构鉴定采用硅胶柱层析与制备型高效液相色谱相结合,对灵芝孢子油不皂化物(UMGSO)进行分离纯化,得到8个化合物,利用波谱学手段、理化性质及相关文献报道数据对照鉴定了各化合物,结构分别为：(22E,24R)-麦角甾-7,22-二烯-3β-醇(1)、麦角甾-7-烯-3β-醇(2)、麦角甾-4,6,8(14),22-四烯-3-酮(3),β-谷甾醇(4)、异岩藻甾醇(5)、麦角甾-7,22-二烯-3β,5α,6β-三醇(6)、麦角甾-7,22-二烯-3β,5α,6α-三醇(7)、5α,6α-环氧-(22E,24R)-麦角甾-8(14),22-二烯-3β,7α-二醇(8)。其中化合物2、4、6、7为首次从灵芝孢子油中分离得到,化合物5、8为首次从灵芝中分离得到。三、灵芝孢子油不皂化物抗肿瘤活性初步研究1.UMGSO对S-180荷瘤小鼠的抑瘤作用研究UMGSO对S-180荷瘤小鼠的抑瘤作用,结果表明高(700mg/kg)、中(140mg/kg)剂量组UMGSO对小鼠肿瘤生长具有显著的抑制作用(p<0.05),与阴性对照组相比,其抑瘤率分别为45.09%、43.40%,而且各剂量组UMGSO对小鼠脾脏指数没有影响。2.UMGSO对HepG2、 MCF-7细胞生长的影响采用MTT法检测UMGSO对人肝癌细胞MepG2、人乳腺癌细胞MCF-7增殖的影响,结果表明：UMGSO对两种肿瘤细胞均有明显的生长抑制作用,且呈剂量依赖性,其IC50分别为14.5μg/mL及16.8μg/mL。以上实验表明：UMGSO在灵芝孢子油的抗肿瘤疗效中发挥着重要作用。四、灵芝孢子油中麦角甾-4,6,8(14),22-四烯-3-酮的含量测定研究麦角甾-4,6,8(14),22-四烯-3-酮(EG)是UMGSO主要甾体成分之一,现有研究证明其能够抑制多种肿瘤细胞的增殖[38-40],且EG为菌类植物油的特有成分,与总三萜、脂肪酸、麦角甾醇等质量控制指标相比更具有特征性。因此本章对灵芝孢子油中EG的含量进行研究,采用YMC-Pack ODS-A色谱柱,以纯甲醇为流动相,柱温30℃,流速1mL．mill-1,检测波长350nm,建立高效液相色谱法测定灵芝孢子油中EG的含量。结果表明EG在1.39-33.34μg．mL-1范围内与峰面积呈良好线性关系r=1),平均加样回收率(n=6)为100.70%(RSD=0.75%)。由于该方法稳定,准确,重复性好,可用于灵芝孢子油中EG的含量测定。