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研究目的卵巢癌是女性常见的生殖器官恶性肿瘤,因其早期的临床症状不明显,缺乏有效的早期诊断手段,75%的卵巢癌患者发现时已为晚期,大多已经产生盆腹腔转移而失去手术切除的机会,5年生存率仅为20%-30%,是妇科肿瘤中死亡率最高的恶性疾病,而早期卵巢癌患者的5年生存率可达90%。目前卵巢癌的治疗方案复发率和耐药率高,生存期没有得到有效的提高。因此寻找一个特异性靶点进行早期诊断及有效治疗是当前卵巢癌研究迫切需要解决的问题。研究发现,血管内皮生长因子受体-2／血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor receptor-2/vascular endothelial growth factor, VEGFR-2/VEGF)信号通路参与肿瘤周围新生内皮细胞的迁移、增殖和生存,在肿瘤周围新生血管生成过程中起到重要的作用。VEGF有多种蛋白形式,其中VEGF165的促血管生成作用最显著。VEGFR-2是介导VEGF165发挥促血管生成作用的主要受体,在VEGF的信号转导及血管内皮生成中起主导作用,并且在卵巢癌肿瘤组织中高表达。本研究拟建立卵巢癌荷瘤裸鼠模型,采用131I-VEGF165进行放射自显影显像来探讨VEGFR-2是否可以作为卵巢癌核素显像的新靶点。ISO-1[(S,R)-3-(4-羟苯基)-4,5-二氢-5-异(?)唑乙酸甲酯]是特异性的巨噬细胞移动抑制因子(macrophage migration inhibitory factor, MIF)酶抑制剂,可以选择性地结合MIF互变异构酶的活性位点,明显抑制MIF活性,但ISO-1在卵巢癌中是否可以通过影响MIF的活性来调控VEGFR-2的水平目前尚未见报道。本研究旨在通过观察不同浓度ISO-1对人卵巢癌细胞增殖、侵袭及对VEGFR-2的作用,为以VEGFR-2为靶点进行卵巢癌治疗奠定实验基础。研究方法采用放射性碘化标记Iodogen法合成131I-VEGF165,用SephadexG25柱纯化,利用纸层析法测定其标记率及放化纯,同时进行卵巢癌细胞对131I-VEGF165的摄取实验。建立荷人卵巢癌裸鼠模型,待肿瘤生长至1.0cm×1.0cm左右用于显像。荷瘤裸鼠尾静脉注射131I-VEGF165后分别于3h、6h和8h进行放射自显影显像和体内分布实验,RT-PCR、Western blot和免疫组化法检测肿瘤组织中VEGFR-2的表达。不同浓度的ISO-1作用于人卵巢癌细胞SKOV3、A2780,对照组以相应浓度的稀释液处理。MTT法检测卵巢癌细胞增殖：L-多巴色素甲酯法测定卵巢癌细胞MIF互变异构酶活性；微孔迁移法检测卵巢癌细胞体外侵袭；卵巢癌细胞凋亡的检测；RT-PCR检测卵巢癌细胞mRNA的表达；细胞免疫化学检测卵巢癌细胞蛋白的表达。实验结果131I-VEGF165的标记率为90.47%,放化纯为94.17%,标记物免疫活性好。细胞摄取实验表明卵巢癌细胞在与131I-VEGF165混合孵育0.5、1、2、4和24h后,卵巢癌细胞SKOV3对131I-VEGF165的摄取率均明显高于对照Na131的摄取(P＜0.05); RT-PCR、Western blot和免疫组化结果表明在移植瘤部位VEGFR-2的mRNA、蛋白均特异性高表达；体内分布实验显示荷瘤裸鼠在尾静脉注射131I-VEGF165后T/NT比值分别为2.72±0.19(3h),4.85±0.81(6h)和3.31±0.57(8h)；放射自显影显像表明荷瘤小鼠在尾静脉注射I31I-VEGF165后3h移植瘤部位开始有放射性浓聚,6h移植瘤可清晰显像,这与131I-VEGF165在荷瘤裸鼠移植瘤部位有较高的T／NT比值相一致。ISO-1能显著抑制人卵巢癌细胞SKOV3、A2780的增殖及其MIF互变异构酶活性(P＜0.05)；50μmol/L ISO-1作用于卵巢癌细胞SKOV3、A278024h后,其穿透聚碳酸酯膜的能力显著降低(P＜0.05),且细胞凋亡明显,同时卵巢癌细胞的VEGFR-2、VEGF的mRNA和蛋白水平显著降低(P＜0.05)。结论放射性碘化标记的131I-VEGF165制备简便、性能稳定,能够特异性靶向聚集于肿瘤部位,且在靶组织中清除缓慢,放射自显影图像质量好,提示VEGFR-2可作为卵巢癌早期诊断的特异性靶点；ISO-1可抑制卵巢癌细胞的增殖及侵袭,能显著下调VEGFR-2、VEGF的表达。为临床卵巢癌以VEGFR-2为靶点的早期特异性诊断和靶向治疗奠定了实验基础。