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将已知BYDV-GPV部分序列，与其他黄症病毒序列比较，合成相应的上下游引物，以BYDV-GPV株系病毒RNA为模板，RT-PCR分别扩增了GPV株系的ORF1和ORF2基因片段。经过酶切、连接、转化，将2个基因片段分别插入到pUC19质粒之中，获得了重组质粒pUC19-ORF1和pUC19-ORF2。对基因片段进行序列分析结果表明，ORF1全长1953个核苷酸，可编码651个氨基酸、分子量为71.4kD的蛋白质；ORF2全长1872个核苷酸，可编码624个核苷酸、分子量为70.1kD的蛋白。在ORF1和ORF2之间存在着一较长的重叠区域，达601个核苷酸。与其他黄症病毒的序列比较结果，GPV与RPV的同源性最高，ORF1同源性达66.4％，ORF2达81.7％；推测出的编码氨基酸序列，P1同源性为55.6％，P2为81.5％。与PAV的同源性最低，核苷酸同源性分别为ORF1/44％，ORF2/42％，并且仅为部分同源；推测的氨基酸序列几乎没有同源性。 根据测定的基因序列，分别设计合成相应引物，RT-PCR扩增ORF1和ORF2基因片段，将基因片段分别插入到含Emu启动子的质粒pEmu-mcs-N之中，构建成用于小麦转化的植物表达载体pPPI 12（ORF2重组质粒）和pPPI 13（ORF1重组质粒）。利用花粉管通道途径分别转化了小麦品种陕160、陇鉴127及晋麦47、京冬8号。对得到的转化种子经过卡那霉素抗性筛选、田间直接抗病性筛选、Dot blot、PCR检测和Southern分析，最终得到3个阳性的T1代ORF2转基因系。其中2个为陕160转化后代，1个为陇鉴127转化后代。温室和田间的抗病性鉴定，陕160转基因系表现出具有高度的抗性，在对照植株严重发病时不表现症状或仅出现轻微的叶尖发黄症状；陇鉴127转基因系可达到减轻症状的效果，在对照叶片全部黄化时，仍能保持旗叶不发病或发病面积小于1/3。ORF1基因转化后代中没有检测到Southern阳性中国农业科学院博士学位论文的转化株。 缺失OgyZ基因转化小麦收获的转化种子，经过卡那霉素筛选、PCR检测和 Southern分析，陕 160、晋麦 47和陇鉴 127三个品种的转化材料，仅在晋麦47后代中得到了阳性的转化株，TI代Southern检测中，2个转基因系获得了阳性的结果。转基因材料进行的田间抗病性鉴定结果，表现出椎迟发病减轻症状的效果。