孕酮在犬子宫蓄脓发病过程中的作用研究

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随着我国宠物行业的发展,人们对宠物的健康越来越重视,而子宫蓄脓是危害宠物健康的重要疾病之一,尤其是对老年宠物的健康影响较为严重。犬子宫蓄脓早在上个世纪五十年代首次由Dow提出,该病的发病机制非常复杂,多数学者认为犬子宫蓄脓是在细菌和激素共同作用下引起的。并且孕酮在该病的发病机制上的作用不容忽视,Dow曾通过对健康犬进行外源性注射孕酮,成功地复制了该病的病例模型,并发现在同时注射雌激素的情况下,会减少复制病例模型时所需的孕酮注射量。为了进一步探讨犬子宫蓄脓的发病机制,研究孕酮在犬子宫蓄脓发病过程中的作用,本试验从细胞水平上通过对子宫内膜上皮细胞体外培养以及免疫组化法(ICH)检测孕酮受体两方面探讨孕酮对子宫蓄脓发病的影响关系,为该病的发病机制提供可靠的临床依据,并为犬科动物的体外细胞培养提供依据。通过子宫卵巢摘除术分别无菌采取健康犬与发病犬子宫角,进行常规石蜡切片、HE染色观察发病犬子宫组织的病理变化;同时对组织切片进行孕酮受体的免疫组化检测(IHC),对比观察健康犬与发病犬子宫内的孕酮受体敏感性变化;将无菌采取的健康犬子宫进行内膜上皮细胞的原代培养,并将所获得的细胞随机分为对照组、雌激素刺激组、孕酮刺激组、雌激素孕酮共同刺激组,通过对相同面积内的细胞进行计数,比较激素对细胞体积的影响作用。将无菌采取的10例健康犬与10例发病犬的子宫角清洗后进行标记,并用4%甲醛进行固定备用。然后分别做石蜡切片,标记后备用。采用HE染色后,实验结果表明发病犬子宫内膜层不完整、并呈现出不同程度的萎缩、脱落,与健康犬相比发病犬子宫内膜层的腺体数量增多、较严重的病例组织中腺管出现扩张并伴有不同程度的炎性细胞浸润,在子宫壁增厚的病例中,还可观察到肌肉层水肿的现象。但就本实验所采集的病例中,在出现子宫蓄脓后大部分犬的子宫壁变薄,子宫组织不完整。采用免疫组化法(IHC)测定孕酮受体结果:经过IHC染色后,所采取的健康组犬子宫角有3例孕酮受体检测结果为阴性,其余7例均为阳性。而发病组犬的子宫中,其孕酮受体检测结果均为阳性,并且集中分布在腺体周围。细胞培养结果:将无菌术采取的健康犬子宫角清洗后,进行子宫内膜原代细胞培养。利用不同浓度的孕酮(30ng/mL,35ng/mL,40ng/mL)、雌激素(30pg/mL,35pg/mL)对犬子宫内膜原代细胞进行刺激培养,在相同培养时间内,在相同面积内进行细胞计数,并进行比较分析。结果发现孕酮刺激组的细胞体积与对照组相比明显增大(P<0.01),孕酮与雌激素共同刺激组的细胞体积也明显增大(P<0.01),而雌激素刺激组的细胞体积变化不明显(P>0.05)。实验结果表明,犬在患有子宫蓄脓后,子宫壁会变薄,子宫内膜层根据病情呈现出不同程度的萎缩以及脱落,严重的病例肌层也会出现萎缩;在发病过程中,子宫内的腺体增多,扩张,并伴有不同程度的炎性细胞浸润;发病初期犬的子宫内膜层还会出现不同程度的囊性增生。免疫组化结果表明,犬在发病时其子宫内孕酮受体敏感性增高,使孕酮对子宫的作用增强。子宫内膜上皮细胞的原代培养结果表明,孕酮会导致子宫内膜上皮细胞发生体积增大的病理变化,这一现象与犬发病初期时子宫内膜层常呈现出不同程度的囊性增生的病理变化响吻合,从而表明了孕酮在犬的子宫蓄脓发病过程中起着重要的作用。
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