【摘 要】
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目的:探讨独活寄生汤（DHJST）对类风湿关节炎模型小鼠淋巴系统及免疫反应的影响;探讨洋川芎内酯I（Senkyunolide I,SEI）对类风湿关节炎模型小鼠淋巴回流功能及炎症反应的影响;探讨洋川芎内酯I对淋巴管内皮细胞的炎症反应情况和对Notch与NF-κB信号通路的影响,以及对淋巴管平滑肌细胞功能基因的影响。方法:1.独活寄生汤对TNF-Tg小鼠淋巴系统及免疫反应的研究采用随机数字表法将10
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目的:探讨独活寄生汤（DHJST）对类风湿关节炎模型小鼠淋巴系统及免疫反应的影响;探讨洋川芎内酯I（Senkyunolide I,SEI）对类风湿关节炎模型小鼠淋巴回流功能及炎症反应的影响;探讨洋川芎内酯I对淋巴管内皮细胞的炎症反应情况和对Notch与NF-κB信号通路的影响,以及对淋巴管平滑肌细胞功能基因的影响。方法:1.独活寄生汤对TNF-Tg小鼠淋巴系统及免疫反应的研究采用随机数字表法将10只3月龄TNF-α转基因（TNF-Tg）小鼠随机分为模型组（TNF-Tg）和DHJST组,5只/组;5只野生型同窝小鼠作为正常对照（Control）组。DHJST组采用独活寄生汤灌胃,TNF-Tg组和Control组采用相同体积的生理盐水灌胃,1次/天,12周后取材。采用阿尔新蓝-苏木精（ABOG）染色观察骨量及滑膜炎症情况;免疫荧光染色,观察促炎M1型巨噬细胞、淋巴管新生以及分布情况。2.洋川芎内酯I对TNF-Tg小鼠淋巴回流功能及炎症反应的研究采用随机数字表法将18只2月龄左右TNF-Tg小鼠随机分为TNF-Tg组和SEI组,6只/组;6只野生型同窝小鼠作为Control组。SEI组采用洋川芎内酯I溶剂灌胃,TNF-Tg组和Control组采用相同体积的生理盐水灌胃,1次/天,10周后取材。采用苏木精-伊红（HE）染色观察肝肾毒性及滑膜炎症情况;ABOG染色观察骨量及软骨情况;抗酒石酸酸性磷酸酶（TRAP）染色标记破骨细胞;免疫荧光染色观察,淋巴管新生以及分布情况;吲哚菁绿-近红外（ICG-NIR）检测淋巴管回流功能;腘窝淋巴结三维成像系统检测淋巴结情况;热痛仪检测小鼠足底痛阈值。3.洋川芎内酯I对淋巴管内皮及平滑肌细胞的机制研究研究洋川芎内酯I对TNF-α诱导的炎症环境下淋巴管内皮细胞（lymphatic endothelial cell,LECs）炎症表型的影响;淋巴管内皮细胞与淋巴管平滑肌细胞（lymphatic vessel smooth muscle cell,LSMCs）共培养,检测炎症环境下,研究洋川芎内酯I对淋巴管平滑肌细胞功能基因的影响;用Q-PCR检测Notch信号通路的影响;Western blot检测NF-κB信号通路的影响;细胞免疫荧光染色观察P65入核情况。结果:1.独活寄生汤促进TNF-Tg小鼠淋巴管新生,减轻关节炎症独活寄生汤治疗12周后,踝关节组织形态学染色结果显示,软骨侵蚀、骨侵蚀以及滑膜炎症情况明显改善,促炎M1型巨噬细胞数量减少,毛细淋巴管生成增加,集合淋巴管分布广。2.洋川芎内酯I促进TNF-Tg小鼠淋巴回流,减轻关节炎症洋川芎内酯I治疗10周后,进行ICG-NIR检测结果显示,洋川芎内酯I可提高淋巴管搏动频率和清除率;腘窝淋巴结三维成像结果显示,洋川芎内酯I可以减轻淋巴结的肿胀程度;热痛仪检测结果显示,洋川芎内酯I可提高小鼠足底部热痛阈值;踝关节组织形态学染色结果显示,洋川芎内酯I能减轻滑膜炎症、减少破骨细胞数量、改善软骨与骨侵蚀情况和促进淋巴管新生,对肝肾无明显毒副作用。3.洋川芎内酯I减轻淋巴管内皮细胞炎症水平,提高淋巴管平滑肌细胞功能基因表达洋川芎内酯I对TNF-α诱导的淋巴管内皮细胞炎症因子水平、Notch和NF-κB信号通路有抑制作用;洋川芎内酯I促进TNF-α诱导后淋巴管平滑肌细胞功能基因表达水平的恢复。结论:独活寄生汤及有效成分洋川芎内酯I可以促进淋巴管的回流功能治疗TNF-Tg小鼠的关节炎症,洋川芎内酯I通过抑制TNF-α诱导的淋巴管内皮细胞炎症,抑制Notch和NF-κB信号通路,改善淋巴管平滑肌细胞功能基因的表达,促进淋巴回流功能。图34表0参136
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