瘤胃细菌发酵产物—植物外啡肽活性与构成的研究

来源 :扬州大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:leosky_001
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本论文研究了运用过瘤胃保护技术增加植物蛋白在后段消化道的降解,从而增加了蛋白降解的中间产物——植物外啡肽,初步探索了其对山羊生长代谢的调节作用,并建立了一种简单快速的外啡肽生物学活性的检测装置——蛙心体外循环系统装置,同时利用简易人工瘤胃,降解植物蛋白,探寻适时提取并大量生产外啡肽最适宜条件,并初步研究了肌肉注射植物外啡肽对肉仔鸡的生长性能和免疫功能的影响。实验分四个系列: 系列一:蛋白过瘤胃保护增强植物外啡肽对山羊生长代谢的调节作用 本试验采用过瘤胃保护技术使饲料中的小麦蛋白避开山羊瘤胃微生物破坏作用进入皱胃和小肠降解,产生活性肽增强生长代谢的调节作用。并建立蛙心体外循环系统,利用外啡肽特异阻断剂—纳洛酮,生物检测不同消化液中植物外啡肽的活性。试验结果表明,对照期和试验期相比较分别是:采食青草量4.65±0.231,6.413±0.039kg/24h(P≤0.001),差异极其显著;血清类胰岛素生长因子-1(insulin like growth fator 1,IGF-1)153.647±18.670,223.993±19.450ng/ml(P<0.01),差异极其显著。血清生长激素23.170±0.891,26.792±1.003ng/ml(P<0.01),差异极其显著。血清胰岛素18.103±1.035,23.983±1.600ng/ml(P<0.01),差异极其显著。血清氨基氮0.102±0.003,0.140±0.004mM/ml(P<0.001),差异极其显著。血清氨氮0.206±0.012,0.086±0.006mM/ml(P<0.001),差异极其显著。蛋白过瘤胃保护后的皱胃液以及未保护的瘤胃液能使心肌收缩力显著性增强,加入纳洛酮后心肌收缩力都显著性逆转降低,从而证明这些消化液具有较强的外啡肽活性。表明蛋白过瘤胃保护技术能够有效地增强植物外啡肽对生长代谢的调控作用,提高饲料蛋白利用率。扬州大学硕士学位论文系歹lJ二:心脏体外循环系统检测植物外啡肤活性的研究 本试验利用猪胃蛋白酶在37OC条件下降解中筋粉,采集不同反应时间的酶解液样品,低温离心处理后,分别加入蛙心、体外循环系统中,测定心肌收缩力变化,并随即加入阿片肤特异性阻断剂一纳洛酮,检测植物外啡肤活性。结果表明,酶解液能够引起浏自肌收缩力加强,并可被纳洛酮逆转,说明酶解液具有植物外啡肤活性。因此蛙心体外循环系统可很好的检测外啡肤的生物学活性。系歹lJ三:利用瘤胃细菌降解面筋蛋白适时提取植物外啡肤的研究 本试验利用人工瘤胃装置,选用经定向培育的瘤胃细菌体外发酵面筋蛋白并适时提取发酵液进行植物外啡肤构成与活性的研究。结果显示:体外发酵llh后外啡肤的生物学活性最强;此时的肤浓度也相对较高:建立了超滤结合纸层析法检测外啡肤构成的技术,所显示的色带表明大约为10~27肤左右;以发酵11h为最适发酵时间,此时,人工瘤胃装置的发酵参数:pH为6.412士0.207、总脱氢酶活性(TDHA)为1.037士O.045U/ml、OD600为1.410切.065、氨氮(NH3一N)为131.836士14.o68mg/dl、微生物总蛋白(MCP)为6.213士l.ol4mg/m一,表明发酵处于良好状态。系列四:肌肉注射外啡肤对鸡免疫机能、生产性能和内分泌的影响 采用本文所制备的植物外啡肤进行AA肉鸡饲养试验,研究肌肉注射不同剂量的外啡肤对肉鸡免疫功能、生长代谢的影响。数据显示试验组Neweastle Diease(ND)一Hemagglutination Inhibition(Hl)的滴度显著性高于对照组,试验组7一35日龄的体增重也显著高于对照组,试验组血清中g一owth hormone(、 GH)、insulin(Ins)、thy一oxine(T3)、t一iiodothyronine(T4)的浓度也显著高于对照组,综合实验结果表明:以Zml/KgBw/w eek的外啡肤剂量肌注肉鸡效果最好。
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