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第一部分：Y药的抗炎药效与作用机制研究
抗炎类药在世界上消耗量巨大，仅次于抗生素类药。临床上常用的甾体类和非甾体类抗炎药，不良反应诸多。中药抗炎药在我国使用历史悠久，资源丰富，不良反应少，优势明显，引起了人们广泛的关注。Y药为某医院制剂，具有良好的消炎抗菌活性，且对临床致病菌无耐药性和抗药性，但其药效和作用机制未被系统研究。基于此，本研究以Y药为研究对象，以SPF级SD大鼠和KM小鼠、RAW264.7细胞、临床致病细菌为受试对象，研究 Y药对急慢性炎症反应、体内外抗炎机制以及抗菌活性的影响，具体内容如下：
1.药效学研究：通过安全性实验对Y药的安全性和最大灌胃剂量进行检测，通过小鼠耳廓肿胀实验、小鼠腹腔毛细血管通透性增加实验、大鼠棉球肉芽肿实验和大鼠足趾肿胀实验对 Y药的抗急性和慢性炎症药效进行检测。结果证明，Y药对小鼠毒性较小，使小鼠体重增加，对小鼠的最大安全灌胃剂量为100 mg/kg；同时Y药可促进小鼠胸腺生长、减少脾脏萎缩，抑制小鼠耳廓肿胀、腹腔毛细管通透性增加和大鼠棉球肉芽肿；在3 h时，对大鼠足趾肿胀抑制效果最佳。提示， Y药毒性低，对急慢性炎症具有一定的效果。
2.体内抗炎机制研究：通过腹腔注射 LPS和 LPS滴鼻的联合诱导建立小鼠ALI模型，检测小鼠肺组织病理、血清中 IL-1β、PGE2含量变化以及肺组织中COX-2、NLRP3、p65蛋白和磷酸化 p65表达情况，探讨 Y药体内抗炎及可能的作用机制。结果表明，给予Y药后，ALI小鼠肺组织炎性浸润和红细胞弥漫减少，肺泡组织完整性增加；同时血清中 IL-1β、PGE2含量和肺组织中COX-2、NLRP3蛋白表达降低，磷酸化p65表达被抑制。说明Y药能够调控NF-κB信号通路，影响炎症相关蛋白的表达和炎症相关因子的分泌，改善组织损伤，发挥体内抗炎作用。
3.体外抗炎机制研究：通过 MTT法检测出 Y药含量为0~8 mg/mL时，对RAW264.7细胞影响较小。同时，LPS处理RAW264.7细胞12 h时，造模效果最佳。通过LPS诱导RAW263.7细胞建立体外炎症模型后，检测细胞培养液中IL-1β、PGE2含量变化和细胞中COX-2、NLRP3、p65蛋白和磷酸化p65表达情况，探讨Y药体外抗炎及可能的作用机制。结果表明，给药组 RAW264.7细胞培养液中IL-1β、PGE2含量和细胞中COX-2、NLRP3蛋白表达量减少，磷酸化p65表达降低。说明Y药可抑制炎症相关因子的分泌和炎症相关蛋白的表达，影响NF-κB信号通路活性，发挥体外抗炎作用。
4.体外抗菌活性研究：通过检测抑菌圈大小、最小抑菌浓度(MIC)和细菌生长曲线，探讨Y药体外抗菌活性。结果表明，Y药对金黄色葡萄球菌抑菌效果明显，4 h左右抑制金黄色葡萄球菌生长效果最佳，且抑菌圈大小和MIC分别为26.04±0.87 mm、25 mg/mL。而Y药对大肠杆菌、粪肠杆菌、铜绿假单胞菌、肺炎链球菌抑菌效果不佳。
第二部分：莲心总碱对LPS/GalN诱导急性肝衰竭小鼠的保护作用研究
急性肝衰竭(acute liver failure，ALF)是由多因素引起的肝功能失衡危重临床综合征。氧化应激和炎症反应伴随着 ALF的发生和发展，在 ALF中起着重要作用。本部分以莲心总碱为(total alkaloids from embryos ofNelumbo Nucifera，TAENN)研究对象，以SPF级小鼠为受试对象，研究TAENN对ALF小鼠氧化应激和炎症反应的影响，探讨TAENN对ALF小鼠的保护作用，具体内容如下：
1.通过检测LPS/GalN建立小鼠ALF模型后小鼠生存曲线、肝组织病理变化、肝脏指数、血清转氨酶活性、血清及肝脏内中SOD、GSH、MDA、ROS、CAT和GSH-Px含量水平，探讨TAENN对氧化应激的影响。结果表明服用TAENN后，小鼠死亡率降低，小鼠肝脏显微结构改善；血清中血清转氨酶活性和 MDA含量水平显著降低， SOD和GSH含量水平明显升高；且肝脏组织中ROS和MDA含量水平降低，而CAT、GSH、SOD和GSH-Px水平明显升高。提示TAENN可抑制ALF小鼠体内氧化应激。
2.通过检测小鼠ALF模型血清和肝脏中TNF-α、IL-1β、IL-6含量水平，肝脏中TNF-α、IL-1β、IL-6、iNOS、COX-2的mRNA表达水平，以及肝脏中iNOS、COX-2、p65蛋白和磷酸化p65的表达水平，探讨TAENN对炎症反应的影响。结果表明，服用TAENN后，小鼠血清和肝脏中TNF-α、IL-1β和IL-6含量水平显著减少，肝脏中NO和PGE2含量水平下降显著，肝脏组织中TNF-α、IL-1β、IL-6、iNOS、COX-2基因mRNA表达抑制，iNOS和COX-2蛋白水平下降，p65磷酸化水平降低。提示TAENN可改善ALF小鼠体内炎症反应。
抗炎类药在世界上消耗量巨大，仅次于抗生素类药。临床上常用的甾体类和非甾体类抗炎药，不良反应诸多。中药抗炎药在我国使用历史悠久，资源丰富，不良反应少，优势明显，引起了人们广泛的关注。Y药为某医院制剂，具有良好的消炎抗菌活性，且对临床致病菌无耐药性和抗药性，但其药效和作用机制未被系统研究。基于此，本研究以Y药为研究对象，以SPF级SD大鼠和KM小鼠、RAW264.7细胞、临床致病细菌为受试对象，研究 Y药对急慢性炎症反应、体内外抗炎机制以及抗菌活性的影响，具体内容如下：
1.药效学研究：通过安全性实验对Y药的安全性和最大灌胃剂量进行检测，通过小鼠耳廓肿胀实验、小鼠腹腔毛细血管通透性增加实验、大鼠棉球肉芽肿实验和大鼠足趾肿胀实验对 Y药的抗急性和慢性炎症药效进行检测。结果证明，Y药对小鼠毒性较小，使小鼠体重增加，对小鼠的最大安全灌胃剂量为100 mg/kg；同时Y药可促进小鼠胸腺生长、减少脾脏萎缩，抑制小鼠耳廓肿胀、腹腔毛细管通透性增加和大鼠棉球肉芽肿；在3 h时，对大鼠足趾肿胀抑制效果最佳。提示， Y药毒性低，对急慢性炎症具有一定的效果。
2.体内抗炎机制研究：通过腹腔注射 LPS和 LPS滴鼻的联合诱导建立小鼠ALI模型，检测小鼠肺组织病理、血清中 IL-1β、PGE2含量变化以及肺组织中COX-2、NLRP3、p65蛋白和磷酸化 p65表达情况，探讨 Y药体内抗炎及可能的作用机制。结果表明，给予Y药后，ALI小鼠肺组织炎性浸润和红细胞弥漫减少，肺泡组织完整性增加；同时血清中 IL-1β、PGE2含量和肺组织中COX-2、NLRP3蛋白表达降低，磷酸化p65表达被抑制。说明Y药能够调控NF-κB信号通路，影响炎症相关蛋白的表达和炎症相关因子的分泌，改善组织损伤，发挥体内抗炎作用。
3.体外抗炎机制研究：通过 MTT法检测出 Y药含量为0~8 mg/mL时，对RAW264.7细胞影响较小。同时，LPS处理RAW264.7细胞12 h时，造模效果最佳。通过LPS诱导RAW263.7细胞建立体外炎症模型后，检测细胞培养液中IL-1β、PGE2含量变化和细胞中COX-2、NLRP3、p65蛋白和磷酸化p65表达情况，探讨Y药体外抗炎及可能的作用机制。结果表明，给药组 RAW264.7细胞培养液中IL-1β、PGE2含量和细胞中COX-2、NLRP3蛋白表达量减少，磷酸化p65表达降低。说明Y药可抑制炎症相关因子的分泌和炎症相关蛋白的表达，影响NF-κB信号通路活性，发挥体外抗炎作用。
4.体外抗菌活性研究：通过检测抑菌圈大小、最小抑菌浓度(MIC)和细菌生长曲线，探讨Y药体外抗菌活性。结果表明，Y药对金黄色葡萄球菌抑菌效果明显，4 h左右抑制金黄色葡萄球菌生长效果最佳，且抑菌圈大小和MIC分别为26.04±0.87 mm、25 mg/mL。而Y药对大肠杆菌、粪肠杆菌、铜绿假单胞菌、肺炎链球菌抑菌效果不佳。
第二部分：莲心总碱对LPS/GalN诱导急性肝衰竭小鼠的保护作用研究
急性肝衰竭(acute liver failure，ALF)是由多因素引起的肝功能失衡危重临床综合征。氧化应激和炎症反应伴随着 ALF的发生和发展，在 ALF中起着重要作用。本部分以莲心总碱为(total alkaloids from embryos ofNelumbo Nucifera，TAENN)研究对象，以SPF级小鼠为受试对象，研究TAENN对ALF小鼠氧化应激和炎症反应的影响，探讨TAENN对ALF小鼠的保护作用，具体内容如下：
1.通过检测LPS/GalN建立小鼠ALF模型后小鼠生存曲线、肝组织病理变化、肝脏指数、血清转氨酶活性、血清及肝脏内中SOD、GSH、MDA、ROS、CAT和GSH-Px含量水平，探讨TAENN对氧化应激的影响。结果表明服用TAENN后，小鼠死亡率降低，小鼠肝脏显微结构改善；血清中血清转氨酶活性和 MDA含量水平显著降低， SOD和GSH含量水平明显升高；且肝脏组织中ROS和MDA含量水平降低，而CAT、GSH、SOD和GSH-Px水平明显升高。提示TAENN可抑制ALF小鼠体内氧化应激。
2.通过检测小鼠ALF模型血清和肝脏中TNF-α、IL-1β、IL-6含量水平，肝脏中TNF-α、IL-1β、IL-6、iNOS、COX-2的mRNA表达水平，以及肝脏中iNOS、COX-2、p65蛋白和磷酸化p65的表达水平，探讨TAENN对炎症反应的影响。结果表明，服用TAENN后，小鼠血清和肝脏中TNF-α、IL-1β和IL-6含量水平显著减少，肝脏中NO和PGE2含量水平下降显著，肝脏组织中TNF-α、IL-1β、IL-6、iNOS、COX-2基因mRNA表达抑制，iNOS和COX-2蛋白水平下降，p65磷酸化水平降低。提示TAENN可改善ALF小鼠体内炎症反应。