论文部分内容阅读
探讨链脲佐菌素(streptozocin,STZ)所致Wistar大鼠高血糖稳定模型的最佳实验条件;研究糖尿病大鼠高糖状态下冠状小动脉超氧阴离子(O2-)产生量,阐明高糖状态对O2-产生的影响;探讨糖尿病长期高糖状态下O2-产生与kv通道功能的关系。方法应用STZ腹腔注射制备大鼠高血糖模型,计算成模率和死亡率;通过手术显微镜及显微手术器械分离大鼠冠状动脉,冰冻切片制备部分标本,免疫荧光技术测定糖尿病及正常大鼠冠状动脉O2-产生量;应用全细胞膜片钳记录糖尿病大鼠及正常对照组大鼠冠状动脉平滑肌细胞kv通道电流,并在高糖组和对照组细胞外液中加入自由基清除剂,观察电流变化。结果采用一次给药法,50mg/kg剂量组成模率最高。采用两次给药法,其中(10mg/kg第1天,50mg/kg第3天)剂量组成模率最高。两次给药法相对应剂量组成模率比一次给药法高;日照时间短,成模率明显降低,死亡率明显增高;糖尿病模型组大鼠冠状动脉O2-产生量与对照组大鼠及模型组预先加入自由基清除剂组相比明显增加;冰冻切片冠状动脉横切面荧光染色结果表明糖尿病大鼠高糖状态下血管平滑肌与内皮O2-产生均增多;糖尿病大鼠冠状动脉高糖状态下kv通道电流与正常对照组相比降低(糖尿病组峰电流密度为8.95±4.7pA/pF,对照组峰电流密度为27.5±5.1pA/pF),加入自由基清除剂后,糖尿病组降低的电流部分恢复,正常组电流变化不明显。结论用STZ制备糖尿病模型是一种稳定可靠的方法。实验选取雄性Wistar大鼠体重190~220g,在日照时间8h以上的条件下饲养,给药方式采取两步给药法,剂量为10mg/kg第1天,50mg/kg第3天,其成模率最高。高糖通过刺激冠状小动脉产生过量的O2-参与糖尿病状态下的氧化应激,与糖尿病微血管并发症密切联系,并且其引起冠状小动脉kv通道电流降低,影响kv通道的功能活动。