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【目的】（1）构建人SP-B基因启动子（包含-18C/A多态性位点）荧光素酶报告基因重组质粒pGL3-basic/pGL4.17-C/A，分析并比较其在H441细胞中的转录活性；（2）研究SP-B-C/A（-18）多态性对足月儿外周血单个核细胞（PBMs）中SP-BmRNA水平的影响。【方法】（1）以人基因组DNA（SP-B-C/A（-18）基因型为AC）为模板，PCR扩增SP-B启动子（-218/+435bp）序列片段，通过TA克隆方法连接到pGM-T载体上，筛选阳性克隆并将目的片段测序。将测序鉴定正确的-18位点分别为C和A的目的片段克隆到荧光素酶表达载体pGL3-basic上构建pGL3-basic-C/A重组质粒，酶切及测序鉴定重组质粒；（2）将构建的pGL3-basic-C/A重组质粒酶切改造，SP-B启动子片段被克隆到pGL4.17载体上构建pGL4.17-C/A重组质粒，经酶切及基因测序鉴定重组质粒；（3）采用脂质体法将构建的两种重组质粒分别和内参质粒pRL-TK同时转染H441细胞，转染24h后应用双荧光素酶检测系统检测细胞裂解液中萤火虫荧光素酶（firefly）及海肾荧光素酶（renilla）活性，两者比值间接反映启动子活性；（4）收集于2012年1月至2012年12月入住华中科技大学同济医学院附属同济医院新生儿重症监护室（NICU）的50例足月新生儿外周血样本，提取外周血基因组DNA进行SP-B-C/A（-18）基因分型，同时提取外周血PBMs中总RNA，实时定量PCR检测PBMs中SP-BmRNA水平，比较SP-B-C/A（-18）不同基因型PBMs中SP-BmRNA表达水平。【结果】（1）构建的重组质粒pGL3-basic/pGL4.17-C/A经酶切及测序鉴定完全正确，-18位点碱基分别为C和A；（2）pGL3-basic-C、pGL3-basic-A重组质粒的firefly/renill比值分别为2.97±0.14、2.25±0.09，明显高于空白质粒载体pGL3-basic（0.20±0.06）（P<0.01），说明构建的pGL3-basic-C/A重组质粒在H441细胞中具有启动子活性；pGL3-basic-C的firefly/renilla比值高于pGL3-basic-A（P<0.01）；（3）pGL4.17-C、pGL4.17-A重组质粒的firefly/renilla比值分别为66.46±3.83、47.50±3.06，明显高于空白质粒载体pGL4.17（4.30±0.44）（P<0.01），说明构建的pGL4.17-C/A重组质粒在H441细胞中具有启动子活性；pGL4.17-C的firefly/renilla比值高于pGL4.17-A（P<0.01）；（4）SP-B-C/A（-18）基因型为CC足月儿PBMs中SP-BmRNA水平显著高于AA基因型者（P<0.01），基因型AC者表达水平亦显著高于AA（P<0.01），基因型CC和基因型AC无明显差异（P>0.05）。【结论】（1）成功构建具有SP-B基因转录活性的pGL3-basic/pGL4.17-C/A重组质粒，SP-B-C/A（-18）多态性影响SP-B基因启动子活性，C等位基因启动子活性高于A等位基因；（2）pGL4.17重组质粒荧光素酶活性高于pGL3-basic重组质粒，是后续研究SP-B基因转录调控更好的选择；（3）SP-B-C/A（-18）多态性亦从体内水平影响SP-B基因转录。【目的】研究高氧暴露下SP-B-C/A（-18）多态性对SP-B启动子活性的调控并探讨相关机制。【方法】（1）将H441细胞随机分为2组：常氧组（21%O2/5%CO2）和高氧暴露组（95%O2/5%CO2），1）实时定量PCR检测两组细胞4h、8h、12h和24h4个时间点H441细胞SP-BmRNA表达水平，蛋白免疫印迹（WesternBlot）检测12h、24h和48h3个时间点H441细胞SP-B蛋白表达水平；2）分别提取6h、12h和24h3个时间点两组H441细胞全细胞蛋白和核蛋白，WesternBlot检测转录因子Sp1的表达水平；（2）将pGL4.17-C/A荧光素酶报告基因重组质粒与内参质粒pRL-TK同时转染H441细胞，转染过夜后分别置常氧或高氧继续培养，于4h、8h和24h分别裂解细胞使用双荧光素酶检测系统检测重组质粒荧光素酶firefly/renilla比值；（3）将pGL4.17-C/A荧光素酶报告基因重组质粒、内参质粒pRL-TK和不同量的CMV-Sp1质粒（0、0.25μg、0.5μg）或CMV-black质粒同时转染H441细胞转染，转染后24h裂解细胞检测荧光素酶活性（firefly/renilla）。【结果】（1）高氧暴露8h、12h和24h，H441细胞SP-BmRNA表达水平上调（P<0.05）；高氧暴露12h和24h，H441细胞SP-B蛋白表达水平上调（P<0.05）；（2）高氧暴露6h、12h和24h，H441细胞全细胞提取蛋白中Sp1表达水平无明显变化（P>0.05），高氧6h、12h细胞核蛋白中Sp1表达水平升高（P<0.05）；（3）高氧上调8h和24hpGL4.17-C/A重组质粒荧光素酶活性（P<0.05）；pGL4.17-C升高程度（高氧/常氧）在8h和24h时间点均高于pGL4.17-A（P<0.05）；（4）与不加CMV-Sp1质粒空白组相比，0.25μg、0.5μgCMV-Sp1质粒可以上调pGL4.17-C（P<0.05）和pGL4.17-A（P<0.05）重组质粒荧光素酶活性；0.25μgCMV-Sp1质粒上调pGL4.17-C和pGL4.17-A荧光素酶活性幅度无明显差别（P>0.05）；0.5μgCMV-Sp1质粒上调pGL4.17-C幅度较pGL4.17-A更显著（P<0.05）。【结论】（1）高氧通过增强SP-B转录上调SP-BmRNA和蛋白水平；（2）SP-B-C/A（-18）多态性影响高氧上调SP-B启动子活性的程度；（3）高氧可能通过增加转录因子Sp1的核移位增强SP-B转录；（4）转录因子Sp1在SP-B基因调控中起正性调节作用，SP-B-C/A（-18）多态性影响Sp1对SP-B的调控作用。