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目的：1、研究子宫腺肌病组异位病灶与对照组正常肌层及两组间在位内膜中MAPK/ERK信号通路因子ERK1 mRNA、ERK2 mRNA及MEK-2、ERK1/2、细胞核内转录因子(NF-k B、 c-Fos、c-Jun)表达水平的差异,揭示MAPK/ERK信号通路在子宫腺肌病发病中的作用机制。2、体外培养人子宫腺肌病病灶细胞作为药物干预载体,观察加味芍药甘草汤含药血清、全方水提液(高低浓度),单体芍药苷、甘草苷(高低浓度)及芍药甘草苷(高低浓度)对病灶细胞MAPK/ERK信号通路因子ERK1 mRNA、ERK2 mRNA及MEK-2、 ERK1/2、细胞核内转录因子(NF-k B、c-Fos、c-Jun)表达的影响,阐明中药复方及单体对子宫腺肌病MAPK/ERK信号通路的干预机制,为临床用药提供实验依据,探索新的作用靶点。研究方法：1、临床收集因子宫腺肌病和宫颈病变行全子宫切除术患者的组织标本,分别作为病例组和对照组,采用荧光定量PCR-探针法、免疫蛋白印迹法检测子宫腺肌病组异位病灶与对照组正常肌层及两组间在位内膜中MAPK/ERK信号通路因子ERK1 mRNA、 ERK2 mRNA及MEK-2、ERK1/2、细胞核内转录因子(NF-k B、c-Fos、c-Jun)表达水平的差异。2、细胞标本采用荧光定量PCR-探针法、免疫蛋白印迹法检测加味芍药甘草汤含药血清,全方水提液(高低浓度),单体芍药苷、甘草苷(高低浓度)及芍药甘草苷(高低浓度)对人子宫腺肌病病灶细胞MAPK/ERK信号通路因子ERK1 mRNA、ERK2 mRNA及MEK-2、ERK1/2、细胞核内转录因子(NF-k B、c-Fos、c-Jun)表达的影响,并设立空白对照组、抑制剂组和阳性药物对照组。结果：1、临床研究部分：子宫腺肌病组异位病灶ERK2 mRNA的表达量高于对照组正常肌层,差异有统计学意义(P<0.05)；子宫腺肌病组异位病灶MEK-2、ERK1/2、c-Fos的表达量高于对照组正常肌层,差异有统计学意义(P<0.05)。子宫腺肌病组在位内膜与对照组在位内膜各指标差异没有统计学意义(P>0.05)。2、细胞实验部分(1)加味芍药甘草汤全方含药血清对人子宫腺肌病病灶细胞增殖的影响：10%含药血清组、20%含药血清组与空白对照组比较,均能抑制子宫腺肌病病灶细胞增殖,差异有统计学意义(P<0.05)；10%含药血清组与20%含药血清组差异无统计学意义(P>0.05)。筛选10%含药血清组为药物血清浓度。(2)含药血清组对子宫腺肌病病灶细胞ERK1 mRNA、ERK2 mRNA表达影响：U0126组(抑制剂组)与空白对照组相比,ERK1 mRNA表达量明显减低,差异有统计学意义(P<0.05)；余各组间差异没有统计学意义(P>0.05)。10%含药血清组、米非司酮组、U0126组与空白对照组相比,ERK2 mRNA表达量均有减低,差异有统计学意义(P<0.05)；10%含药血清组与U0126组相比,U0126组中ERK2 mRNA表达量明显减低,差异有统计学意义(P<0.05)。(3)中药单体及全方水提液组对子宫腺肌病病灶细胞ERK1 mRNA×ERK2 mRNA表达影响：甘草苷高浓度组、芍药甘草苷高浓度组、U0126组与空白对照组相比,ERK1 mRNA表达量均有减低,差异有统计学意义(P<0.05),三组间差异无统计学意义(P>0.05)；芍药苷高浓度组与甘草苷低浓度组、芍药甘草苷低浓度组、全方高浓度组比较,ERK1 mRNA表达量减低,差异有统计学意义(P<0.05)。甘草苷高浓度组、芍药甘草苷高浓度组、U0126组与空白对照组相比,ERK2 mRNA表达量均有减低,差异有统计学意义(P<0.05),三组间差异无统计学意义(P>0.05)；米非司酮组与芍药苷低浓度组、甘草苷低浓度组、全方高浓度组、全方低浓度组相比,米非司酮组ERK2 mRNA表达量减低,差异有统计学意义(P<0.05)；芍药苷高浓度组、芍药苷低浓度组、甘草苷低浓度组与全方高浓度组相比,各单体组ERK2 mRNA表达量减低,差异有统计学意义(P<0.05)。(4)含药血清组对子宫腺肌病病灶细胞MEK-2、ERK1/2、NF-k B、c-Jun、c-Fos表达影响：U0126组(抑制剂组)与10%含药血清组、空白对照组相比,U0126组中ERK1/2表达量明显减低,差异有统计学意义(P<0.05)；其余各组间差异无统计学意义。U0126组、10%含药血清组与空白对照组相比,NF-k B表达量明显减低,差异有统计学意义(P<0.05),两组间差异无统计学意义；10%含药血清组与10%正常大鼠血清组、米非司酮组相比,NF-k B表达量明显减低,差异有统计学意义(P<0.05)。c-Jun各组表达量与空白对照组相比,差异没有统计学意义(P>0.05)。U0126组与10%含药血清组相比,c-Fos表达量明显减低,差异有统计学意义(P<0.05),各组与空白对照组相比,差异没有统计学意义(P>0.05)。(5)中药单体及全方水提液组对子宫腺肌病病灶细胞MEK-2、ERK1/2、NF-k B、 c-Jun、c-Fos表达影响：甘草苷高浓度组、芍药甘草苷高浓度组、U0126组与空白对照组相比,MEK-2、NF-kB表达量明显减低,差异有统计学意义(P<0.05),三组间差异无统计学意义。芍药甘草苷高浓度组、U0126组(抑制剂组)与空白对照组相比,ERK1/2表达量明显减低,差异有统计学意义(P<0.05)；甘草苷高浓度组与全方高浓度组相比,ERK1/2表达量明显减低,差异有统计学意义(P<0.05)；芍药甘草苷高浓度组与甘草苷高浓度组、全方高浓度组相比,ERKl/2表达量明显减低,差异有统计学意义(P<0.05)。芍药苷高浓度组、芍药苷低浓度组、芍药甘草苷低浓度组、全方高浓度组与甘草苷高浓度组相比,甘草苷高浓度组的NF-k B表达量明显减低,差异有统计学意义(P<0.05)；芍药苷高浓度组、芍药苷低浓度组、甘草苷低浓度组、芍药甘草苷低浓度组、全方高浓度组、全方低浓度组、米非司酮组与芍药甘草苷高浓度组相比,芍药甘草苷高浓度组的NF-κ B表达量明显减低,差异有统计学意义(P<0.05)。c-Jun、c-Fos各组与空白对照组相比,差异没有统计学意义(P>0.05)。结论：1、子宫腺肌病组异位病灶MAPK/ERK信号通路中相关因子如基因ERK2,蛋白MEK-2、ERK1/2、c-Fos的表达量高于对照组正常肌层。表明子宫腺肌病异位病灶中存在MAPK/ERK通路的活化,相关通路因子的异常表达,引起异位内膜细胞的增殖和子宫腺肌病的发生。2、加味芍药甘草汤在干预离体子宫腺肌病病灶细胞时能抑制细胞增殖,进而阻止子宫腺肌病的进展,与其组方各中药所含的化学成分多靶点综合作用有关,含药血清、单体及全方水提液对MAPK/ERK通路信号因子的作用效能大小不同,具体结论如下：①加味芍药甘草汤含药血清：10%的含药血清能减低MAPK/ERK信号通路中ERK2. NF-k B的表达,ERK是MAPK/ERK信号通路磷酸化活化的最后一步,活化后的ERK可由胞浆进入胞核激活核内各种转录因子的表达,10%的含药血清减少病灶细胞ERK2的表达,有效阻止了信号通路中胞浆信号因子向细胞核内的转移,也减少核内因子NF-k B的表达,降调通路相关因子的异常激活,抑制子宫腺肌病病灶细胞的过度增殖,进而减缓了子宫腺肌病的进展。②组方中药单体及全方水提液：芍药甘草苷高浓度组能明显减低ERK1、ERK2, MEK-2、ERK1/2、NF-k B的表达；甘草苷高浓度组能明显减低ERK1、ERK2,MEK-2、 NF-k B的表达；芍药甘草苷高浓度组和甘草苷高浓度组沿着MAPK/ERK信号通路的传导,依次降低信号通路因子的异常表达,抑制通路的过度活化引起的细胞增殖。全方水提液组对MAPK/ERK信号通路因子调节作用不明显。与芍药苷相比,芍药甘草苷组可见配伍增效作用。③抑制剂U0126及阳性药物米非司酮：U0126作为MAPK/ERK信号通路的抑制剂,对信号通路中三级激酶级联的传导有明显的抑制作用,能够降调MAPK激酶的激酶MEK-2、MAPK激酶ERK1/2的表达,进而减少NF-k B的表达。米非司酮在临床上作为子宫腺肌病治疗药物,对MAPK/ERK信号通路的干预中能降低信号通路中ERK2的表达,对其它通路因子降调作用不明显。④各组药物对核内因子c-Fos、c-Jun作用效果不明显,这与调节c-Fos、c-Jun信号通路较多相关,可能药物对c-Fos、c-Jun的降调作用不能抵消其它通路对c-Fos、c-Jun的上调作用。3、MAPK信号通路在子宫腺肌病发病中的作用正在被逐渐认识,随着认识的逐步深入,它必将为子宫腺肌病的治疗开创更加明朗的前景。