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目的:
对枳棋子的化学成分进行初步研究,通过动物实验筛选出枳棋子具有解酒作用的活性提取部位,并对其解酒机理进行初步探索,为枳棋子的开发利用提供实验基础。
方法:
第一部分:枳椇子的提取及化学成分初步研究采用超临界流体萃取仪提取枳棋子的脂溶性成分,用正交实验设计优化超临界流体萃取的条件,对提取出的脂溶性成分进行GC-MC分析。药渣部分用梯度极性的溶剂进行萃取,将枳棋子分成超临界流体提取部位、氯仿提取部位、乙酸乙酯提取部位、正丁醇提取部位、水提取部位五部分。
第二部分:枳棋子解酒有效提取部位的筛选采用药理活性筛选实验研究枳棋子具有解酒作用的活性提取部位。首先探索56°二锅头酒的给酒剂量和枳棋子的安全给药剂量。实验时将小鼠随机分成7组,模型组(灌胃生理盐水0.40mL/20g)、超临界流体提取物组、氯仿提取物组、乙酸乙酯提取物组、正丁醇提取物组、水提取物组分别给予相应的提取物,对照组(灌胃海王金樽20g/kg)。各组小鼠给药30分钟后灌胃56°二锅头酒(0.36mL/20g),记录小鼠给酒后6h内的醉酒时间与醉酒率:小鼠给药30分钟后按0.40mL/20g给酒考察24h内小鼠死亡率;测定小鼠给酒后0.5h、1h、1.5h、2h、3h、4h的血液乙醇浓度,绘制血液乙醇浓度-时间曲线。
第三部分:枳棋子乙酸乙酯提取部位的解酒作用研究将小鼠随机分成4组:模型组(灌胃生理盐水)、乙酸乙酯提取物低剂量组(灌胃乙酸乙酯提取物相当于10g生药/kg)、乙酸乙酯提取物高剂量组(灌胃乙酸乙酯提取物相当于20g生药/kg)、阳性对照组(灌胃海王金樽20g/kg)。测定各种提取物对急性酒精中毒小鼠血液SGPT活性、肝脏MDA含量、ADH活性、GSH含量、SOD活性的影响,进一步研究枳椇子乙酸乙酯提取部位的解酒作用,并对其解酒机理进行初步探索。
结果:
1.枳棋子脂溶性成分超临界流体提取的最佳提取条件为:压力32MP、温度40℃、时间1h。枳棋子脂肪酸含量约8.3%,经鉴定的脂肪酸有31种。
2.急性酒精中毒小鼠造模的给酒(V/V 56%)剂量为0.36mL/20g,灌胃1次;需多次给酒时,剂量调整为0.30mL/20g。枳棋子75%乙醇提取物按40g生药/kg给药,7日内未见毒性。枳棋子乙酸乙酯提取物可缩短小鼠醉酒时间,降低醉酒率,降低小鼠死亡率,降低小鼠给酒后血液乙醇浓度,减少乙醇浓度一时间曲线下面积。乙酸乙酯提取部位可能是枳棋子解酒的有效提取部位。
3.枳棂子乙酸乙酯提取部位可提高急性酒精中毒小鼠血液SGPT活性,降低小鼠肝脏MDA含量,升高小鼠肝脏ADH活性、SOD活性,升高肝脏GSH含量。枳椇子乙酸乙酯提取部位具有显著的解酒效果,是枳棋子解酒的有效部位。
结论:
枳棋子经超临界流体萃取后,用75%乙醇回流提取,其乙酸乙酯提取部位有较好的解酒作用,是枳棋子解酒的活性提取部位。提示通过进一步研究可将枳棋子开发为治疗乙醇相关性肝病的药物。