长白山药用真菌鸡爪苓子实体全长cDNA文库构建及EST序列初步分析

来源 :延边大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:YISHUIXIAOFENG2501
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鸡爪苓[Polyporus umbellatus(Pers.)Fries.]是长白山区特异的野生猪苓种属。在我国已有2000多年的入药历史。鸡爪苓的生活史经历担孢子-菌丝体-菌核-子实体4个时期。目前,国内主要针对菌核的药理活性等方面的研究,而子实体的相关性研究很少,本轮文研究鸡爪苓子实体发育这一关键问题。揭示鸡爪苓子实体发育过程中功能基因及其代谢调控规律等生物学分析奠定理论基础。本实验是以采自吉林省蛟河市天南乡解放村的鸡爪苓子实体为原始材料,通过 Trizol 改良法提取总 RNA,SMARTTM cDNA Library Construction Kit 试剂盒构建全长cDNA文库。以λTriplEx2为载体建立未扩增的cDNA文库,获得原始文库滴度为5.63×106pfu/mL,经蓝白斑筛选计算重组率为98.73%,目的片段主要.分布于500-2 000 bp。扩增文库的滴度为1.095×1010 pfu/mL,库容量约为:2.19×1012pfu。选取20条基因进行测序,将获得的cDNA片段用DNAstart软件进行预处理,长度分在304-1 226 bp之间,均为高质量的EST序列,具有ORF、5’ UTR区和3’ UTR区。在Nr/Nt数据库中进行Blast分析。结果表明,成功提取鸡爪苓子实体总RNA,并构建其高质量全长cDNA文库,为深入研究鸡爪苓子实体生长发育形成机制提供理论基础。
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