为研制高效的净水微生态制剂,本研究以淀粉酶和蛋白酶酶活力为筛选依据,从来源不同的10株枯草芽孢杆菌菌株中筛选出2株淀粉酶及蛋白酶活力相对较优的菌株H001、H008,并对该两株菌的形态及生理生化特征进行鉴定。初步确定所筛选到得菌株均属于芽孢杆菌属,可用于制备高效净水微生态制剂。采用Plackett-Burman设计法和Box-Behnken设计法对枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)H001菌株的液体发酵条件进行优化,筛选影响Bacillus subtilis H001菌株液体发酵菌数增长的关键因素,设计响应面试验对主要因素进行分析,确定各因素最佳水平,进一步试验验证,24h所得发酵菌数是优化前水平的1.5倍。以两种模拟水样对Bacillus subtilis H001菌株的净水作用进行研究。结果表明,该菌株能迅速降解有机物,相对于其它标准枯草芽孢杆菌,更能有效降低水样的COD值和氨氮含量,144h总残渣、过滤性残渣的降解率分别为63.3%和20.4%。是一株具备多项净水功能的优良菌株。鉴于Bacillus subtilis H001菌株优良的淀粉酶蛋白酶活力性质,本研究使用鸟枪法构建该菌株的基因组文库,使用sau3AI限制性内切酶对提取的高分子量基因组DNA进行酶切,回收大小在1.5～7kb的片段,与经BamHI完全酶切的pUC18质粒载体连接,并制备DH5α大肠杆菌高效感受态细胞以提高转化效率,获得了近17000个转化子,质粒快检结果表明98%的转化子含有外源片段;采用改良的目的基因阳性转化子筛选方法,从构建的Bacillus subtilis H001菌株基因组文库中筛选出了7株目标基因阳性克隆菌,将阳性克隆提取质粒并转化,进一步筛选获得3株含有目标基因的阳性克隆;其中具有淀粉酶活力的2株,具有蛋白酶活力的1株。