木聚糖酶菌株的筛选及β-1、4-木聚糖酶基因的克隆

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木聚糖酶是一种重要的β-1,4-糖苷键水解酶,它能将半纤维素中的木聚糖水解成木寡糖和D-木糖.因此在食品、纺织、饲料等方面具有广阔的应用前景.特别是在制浆造纸工业中,用此酶作漂白助剂,能提高纸张白度并减少环境污染.目前木聚糖酶已成为各国研究的热点之一.作者从造纸厂垃圾堆土壤中分离出一株产木聚糖酶的芽孢杆菌菌株(Bacillus sp.F1).抽提其基因组DNA后,用Sau3AI部分酶切,电泳回收3Kb-9Kb长度的DNA片断,纯化 后部分补平.然后与经SalI完全降解、纯化、部分补平后的pBluescript KS质粒载体作连接反应.用连接反应混合物转化大肠杆菌DH5α,构建了基因文库.利用含有与RBB-Xylan的筛选平板,从文库中筛选出含有木聚糖酶基因的目的克隆.经亚克隆后,进行基因序列的测定.结果表明,该基因序列与一个发表的木聚糖酶基因序列高度一致.
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