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目的比较分析肝硬化、肝癌和自身免疫性肝病患者的肠道优势菌群特点及其与临床指标的相关性,筛选能够早期诊断肝癌的特异性微生态指标。方法收集2014年1月至2017年2月间在浙江大学医学院附属第一医院及杭州树兰医院就诊并入组的患者共117例和健康对照30例。根据临床诊断,将病例组分为肝硬化(包括乙肝肝硬化和酒精性肝硬化)、肝癌和自身免疫性肝病(包括原发性胆汁性肝硬变与自身免疫性肝炎)三组,分析三组患者的临床表现、实验室指标、Child-Pugh评分、MELD评分、肠道优势菌群的特点和差异性及其与临床指标的相关性;运用单因素方差分析比较病例组之间及其与健康对照组之间的肠道优势菌群差异性,采用Pearson相关性分析,利用Logistic回归进行单因素分析,筛选出肝癌的特异性肠道细菌,建立指标模型;并将指标模型进行ROC曲线拟合检验,计算其敏感性和特异性。结果本研究中共纳入117例慢性肝病患者,以中老年人群为主,平均年龄55.4±12岁,男/女=1.39:1。肝硬化及肝癌患者以男性为主,所占比例分别为79.5%与81.6%,自身免疫性肝病患者则以女性为主(94.3%)。肝癌与肝硬化患者的Child-Pugh评分及MELD评分均存在极显著性差异(P<0.001)。肝癌及肝硬化患者多以全身症状及消化道不适为主要临床表现,且50%以上患者有门脉高压症表现。总体上,肝硬化组并发症发生率总体高于肝癌组。肝癌、肝硬化、自身免疫性肝病及健康对照四组组间对比结果提示普拉梭菌、肠球菌、类杆菌、双歧杆菌、乳酸菌、柔嫩梭菌、直肠真杆菌、肠杆菌及B/E值均存在极显著性差异(P<0.01)。与健康对照组相比,三个病例组有益细菌双歧杆菌以及B/E值均显著降低,有害菌肠杆菌均显著增加;肝硬化患者肠道柔嫩梭菌显著减少。与其他三组相比,自身免疫性肝病组肠球菌含量显著减少而类杆菌显著增多。相对于其他三组,肝癌患者肠道中具有抗炎作用及产丁酸作用的普拉梭菌相对较少而直肠真杆菌较多。肠道菌群与实验室指标相关性分析结果显示:肝癌组中,普拉梭菌与中性粒细胞百分比(NEUT%)及纤维蛋白原(FBG),直肠真杆菌与NEUT%、超敏C反应蛋白(CRP)、FBG、凝血酶原时间(PT)及Child-Pugh和MELD评分,肠球菌与血小板(PLT),类杆菌与FBG,均呈负相关,而直肠真杆菌与ALB呈正相关,且该组中的相关性均为中度相关。肝硬化组中,普拉梭菌和直肠真杆菌均与谷丙转氨酶(ALT)及谷草转氨酶(AST)呈正相关,而与CRP呈负相关,类杆菌和柔嫩梭菌与白细胞计数(WBC)、中性粒细胞绝对值(NEUT#)、CRP,类杆菌与Child-Pugh评分,酪酸梭菌与CRP,均呈负相关,而肠球菌与CRP呈正相关。利用Logistic回归进行单因素分析筛选出肝癌特异性微生态指标即直肠真杆菌与普拉梭菌的对数值比值(1gEr/1gFp),其与血清甲胎蛋白(AFP)均能区分肝癌与非肝癌患者,但1gEr/1gFp能够鉴别出AFP值在正常范围内的肝癌病例及AFP高于正常值的肝硬化病例(P<0.01)。将AFP、1gEr/1gFp进行二元Logistic回归分析显示,1gEr/1gFp(P<0.05)对肝癌的诊断价值大于AFP(P≥0.05);将两个指标及两者联合对肝癌的检测进行ROC曲线拟合:对于肝癌与肝硬化,1gEr/1gFp与AFP联合检测的ROC曲线下面积最大(AUC=0.786),对肝癌的诊断效果最好,其次为 1gEr/1gFp(AUC=0.748),均优于 AFP(AUC=0.664);且 1gEr/1gFp 的特异性较高(97.7%)。在肝癌与自身免疫性肝病两组,两者联合检测对肝癌的诊断效果最好(AUC=0.949),且其敏感性与特异性分别为81.6%和100%。对于肝癌与高AFP肝硬化以及低AFP肝癌与肝硬化,1gEr/1gFp的ROC曲线下面积均大于0.8,对肝癌的诊断具有一定的的准确性,且1gEr/1gFp对于区分肝癌与高AFP肝硬化的特异性较高为93.3%,而区分低AFP肝癌与肝硬化的敏感性较好为76.5%。对于肝癌与非肝癌患者,1gEr/1gFp与AFP联合检测对肝癌的诊断效果最好(AUC=0.804),其次为 1gEr/1gFp(AUC=0.752),1gEr/1gFp 及联合检测对肝癌诊断的特异性高达98.4%。结论肝癌、肝硬化及自身免疫性肝病患者的肠道优势菌群结构发生了显著的变化,有益细菌双歧杆菌显著减少,有害菌肠杆菌显著增加。在肝硬化发展到肝癌的过程中,肠道菌群可能发生了一些特异性的改变。肝癌患者肠道中同样具有抗炎作用及产丁酸作用的普拉梭菌相对较低,而直肠真杆菌相对较高。肝癌及肝硬化患者肠道菌群与炎症指标、肝功能及凝血功能相关性较高。肠道微生态指标1gEr/1gFp对肝癌诊断的价值大于血清AFP指标;1gEr/1gFp能够很好地区分出AFP值在正常范围内的肝癌患者以及AFP高于正常值的肝硬化患者;总体上,1gEr/1gFp及联合检测对肝癌诊断的特异性优于AFP,且1gEr/1gFp与AFP联合检测对肝癌的诊断效果最好。