当归补血汤经TGF-β1/Smad2及PI3K/Akt信号通路对AngⅡ诱导心肌细胞肥大的影响

来源 :甘肃中医药大学 | 被引量 : 6次 | 上传用户:levmg2
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目的:通过提取当归补血汤含药血清干预血管紧张素Ⅱ(AngiotensinⅡ,AngⅡ)诱导的肥大心肌细胞,探讨中医药当归补血汤对慢性心力衰竭的作用及其保护机制。方法:首先,α-actin抗体免疫组化法鉴定细胞符合心肌细胞;其次,AngⅡ诱导心肌细胞建立肥大心肌细胞模型,再通过BCA法测细胞蛋白及RT-PCR法测细胞ANF mRNA的表达以验证模型;镜下观察心肌细胞空白组、AngⅡ模型组、10%当归补血汤含药血清组和LY294002阻断剂组的细胞形态;RT-PCR测定20%、15%、10%、5%等不同浓度含药血清对H9C2肥大心肌细胞ANFmRNA表达的影响;硝酸还原酶法测心肌细胞空白组、AngⅡ模型组、10%当归补血汤含药血清组和LY294002阻断剂组细胞培养液中NO浓度;蛋白免疫印迹法(Western Blotting)测各组细胞TGFβ1/Smad2及PI3K/Akt通路中TGFβ1、Smad2、P-Akt、Akt、P-eNOS、eNOS等蛋白的表达与活化情况。结果:1.鉴定细胞结果:镜下观察其细胞浆内含有大量棕黄色细密颗粒物质,呈阳性表达,符合心肌细胞的特征;2.造模结果:发现心肌细胞AngⅡ模型组较正常组ANF mRNA及蛋白含量增多(P<0.05),说明AngⅡ诱导心肌细胞肥大模型成功建立;3.镜下观察心肌细胞形态结果:心肌细胞贴壁生长,其形态呈肌细胞样,而肥大心肌细胞较正常心肌细胞的密度和形态均有所增大,漂浮细胞增多;4.测定不同浓度含药血清对心肌细胞ANFmRNA表达结果:AngⅡ模型组较空白组ANFmRNA表达增加(P<0.05);5%、20%含药血清组与模型组ANF表达比较差异均无统计学意义(P>0.05);10%、15%含药血清组较模型组ANF表达含量降低(P<0.05);5.检测心肌细胞培养液NO浓度结果:各组间比较,差异均无统计学意义(P>0.05);6.测定心肌细胞TGFβ1/Smad2及PI3K/Akt信号通路中相关蛋白表达结果:10-6、10-7mol/LAngⅡ模型组较空白组TGF-β1、Smad2蛋白表达增多(P<0.05);10%含药血清组较模型组TGF-β1、Smad2减少(P<0.05);10-7mol/LAngⅡ模型组较空白组P-Akt、Akt、eNOS蛋白表达降低(P<0.05);10%含药血清组较模型组P-Akt、Akt、eNOS蛋白表达增加(P<0.05);LY294002阻断剂组取消10%含药血清组的作用较10%含药血清组P-Akt、Akt、eNOS蛋白表达降低(P<0.05),各组间P-eNOS蛋白表达比较(P>0.05),差异无统计学意义。结论:当归补血汤含药血清对AngⅡ诱导的肥大心肌细胞起保护作用,其机制可能是通过调控心肌细胞TGF-β1/Smad2及PI3K/Akt信号通路有关。
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