猪流行性腹泻的病原为猪流行性腹泻病毒（Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV）。主要诱发猪只发生肠道疾病,其症状表现为呕吐、腹泻,食欲下降,脱水,且具有显著的日龄依赖现象。特别对于7日龄内的新生仔猪,在缺乏有效母源抗体下,死亡率可高达100%。基于近年流行野毒株的出现及大流行,传统商品疫苗已经对当前流行野毒株缺乏产生充分的抵抗作用。因此,对新流行的PEDV变异株进行分子流行病学分析,可为揭示新发PEDV感染致病的分子机制和研制特异性诊断提供必要的理论依据。为了确证从发病猪场腹泻仔猪小肠内容物中分离获得的两株PEDV是强毒,将病料接种经胰酶处理的Vero细胞,获得了可引起细胞产生合胞体的病毒。经三重PCR鉴定,确定分离的病毒为PEDV,分别命名为“CH/GDZH01/1311”（简称“ZH01”）、“CH/GDZH02/1401”（简称“ZH02”）。测定了它们的滴度,分别为1×10^5.50 TCID₅₀/mL和1×10^6.25 TCID₅₀/mL。经特异性强弱毒鉴别PCR检测和动物回归,确证这两毒株为当年流行的野毒。对它们的N基因进行了克隆和测序,结果表明所分离的两个毒株属于G2-1亚群,与目前大部分流行毒株相似性较近,但与G1亚群的经典CV777毒株相似性不高。本文还对ZH02毒株进行了传代致弱,发现经57次传代,该毒株的滴度与亲代毒差异不显著,为1×10^6.75 TCID₅₀/mL,但却明显延缓了新生仔猪的发病和死亡时间。在进行病毒的细胞传代过程中,我们对ZH02株第65代病毒基因组进行了测序。结果发现其与亲本株相比,在S基因和ORF3基因分别存在2个核苷酸和6个核苷酸的缺失。其中S基因胞质区缺失的2个核苷酸引起了氨基酸翻译提前终止。经参阅其他冠状病毒发现,这个胞质区的缺失可以引起病毒S基因的过表达,从而可以引起细胞产生更强烈的细胞融合。作为诱导机体产生主要中和抗体的S蛋白,其过表达将有利于提高病毒的免疫原性。提示其将成为更有利的疫苗候选毒株。在本研究中,我们成功将PEDV流行野毒株的N基因进行原核表达,通过优化表达条件,我们最终在37℃,以Transetta（DE3）表达菌和IPTG浓度为1.0 mmol/L的条件下,诱导5小时得到最佳的蛋白表达量。SDS-PAGE表明所表达的目的蛋白与预测大小相差不大,约为54 KDa。Western Blot验证了该目的条带为重组蛋白。通过PEDVN蛋白抗原检测试剂盒检测,发现其与表达蛋白有良好的反应。