RCD1(radical-induced cell death1)是重要的转录因子调节子,属于植物SRO(similar to rcd one)蛋白家族。研究表明SRO蛋白家族参与植物正常生长发育,同时是多条抗逆信号通路的重要成员。目前关于大豆GmRCD1的功能及其在响应非生物胁迫中的潜在作用尚不清楚。转录因子NAC是一类植物特有的抗逆相关转录因子,其N端为保守的NAC结构域,C端为无序的转录调节区。关于转录因子NAC无序序列区在植物抗逆信号通路中的作用尚不清楚。因此研究GmRCD1与哪些转录因子NAC互作,哪些保守结构域介导了相互作用,在此基础上分析转录因子NAC如何利用其无序序列区与GmRCD1互作调控植物抗逆具有重要的理论及实践意义。本论文首先从大豆cDNA中克隆出GmRCD1基因,构建重组质粒进行自激活检测,通过酵母双杂交系统筛选到17个与GmRCD1抗逆相关候选互作蛋白,并选择6个候选互作蛋白进行了基因全长的回转验证。已有研究表明大豆GmNAC82在拟南芥中的同源基因ANAC82可能通过核糖体信号通路调控植物抗逆,因此我们选择候选互作蛋白GmNAC82进行下一步的研究。利用原核系统表达GmRCD1与GmNAC82蛋白,GST Pull-down实验证明二者在体外能发生直接的相互作用。双分子荧光互补实验(BiFC)和亚细胞定位实验证明GmRCD1与GmNAC82在植物细胞核中发生互作。为了鉴定GmNAC82与GmRCD1互作位点,我们对GmNAC82进行了生物信息学分析,依据筛库实验结果和GmNAC82无序序列区序列特征,设计引物获得了GmNAC82无序序列区的不同缺失克隆。依据GmRCD1序列特征,设计引物获得了GmRCD1的不同保守结构域克隆。通过酵母杂交实验确认GmNAC82利用其无序区内的288-323基序与GmRCD1保守结构域RST互作。综合分析上述结果,利用酵母双杂交系统筛选与GmRCD1互作蛋白,为大豆的分子育种提供了候选基因;首次发现大豆GmRCD1与转录因子GmNAC82相互作用,并使用GST Pull-down和双分子荧光互补对GmRCD1与GmNAC82的相互作用进行了验证;鉴定了GmRCD1与GmNAC82互作关键位点,有助于我们进一步了解转录因子NAC和枢纽蛋白RCD1调控植物抗逆的分子机制。