黄瓜绿斑驳花叶病毒(Cucumber green mottle mosaic virus,CGMMV)主要侵染黄瓜、西瓜、甜瓜、葫芦等葫芦科作物,造成严重的病害,并在许多国家造成巨大的经济损失。CGMMV为我国的检疫对象,在我国部分地区都已检测到。明确CGMMV的侵染来源和致病机理对于有效控制该病毒的危害具有重要的作用。本研究测定了山东济南和青岛CGMMV分离物的全基因组序列,根据系统进化分析结果明确了其来源,成功构建了CGMMV的侵染性克隆。主要结果如下:(1)获得了山东济南和青岛两个CGMMV分离物(CGMMV-JN和CGMMV-QD)的全长基因组序列。序列测定结果表明,CGMMV-JN和CGMMV-QD基因组全长均为6 424核苷酸(nt),5′和3′-UTR分别含有60和176 nt,共有4个开放阅读框(ORF),分别编码129 kDa和186 kDa复制酶相关蛋白、29 kDa移动蛋白及17.4 kDa外壳蛋白。(2)多重序列比对结果显示CGMMV-JN与另外CGMMV分离物全基因组核苷酸序列一致率为90.0%~99.7%。重组分析发现韩国KOM(AF417243)、以色列EC(KF155231)、印度(DQ767631)和我国河北的CHB(KJ658958)4个分离物在RdRp编码区存在重组事件,CGMMV-JN和CGMMV-QD不存在重组事件。选择压力分析结果表明rdrp、mp基因处于负选择,cp基因处于正选择。(3)构建了基于全基因组序列的系统进化树,CGMMV分离物分为3个组,CGMMV-JN和CGMMV-QD都属于I组,其中CGMMV-JN与我国辽宁、台湾及日本分离物较近,CGMMV-QD与我国山东、江苏及韩国分离物较近,根据所用种子来源及系统进化分析结果推测CGMMV-JN和CGMMV-QD可能分别来源于日本和韩国。(4)构建了可以通过农杆菌浸润接种的CGMMV侵染性cDNA克隆。通过融合PCR在RdRp基因内部插入西瓜内含子,将CGMMV-JN基因组插入到载体pCambia0390,获得克隆pCamCGMMV。pCamCGMMV在本氏烟上的症状与野生型CGMMV一致,在西瓜上不表现明显的症状,RT-PCR检测结果显示在接种西瓜和本氏烟上的侵染率都为100%。本研究的结果为探索黄瓜绿斑驳花叶病毒基因功能和致病机理提供重要研究材料。