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目的:在确立适当的寒热刺激温度基础上,研究寒热不同刺激对二乙基亚硝胺(diethylnitro samine,DEN)诱发性肝癌模型大鼠肿瘤生物学特性包括(肿瘤发生、增殖、转移等)的不同影响,并从免疫学角度探讨其可能的作用机制。方法:1、寒热环境模拟优化:雄性Wistar大鼠30只,随机分组为空白对照组及寒热刺激组,寒热刺激组分别在40℃、36℃、-4℃、0℃环境下刺激3 h,1次/d,连续1周,正常对照组在室温22℃下饲养,观察各组在不同环境下的生活状态。2、雄性Wistar大鼠42只,按体质量随机分组为空白对照组(N,n=6)、模型组(G1、n=12)、热刺激组(G2、n=12)及寒刺激组(G3、n=12)。G1、G2、G3按体质量10 mg/kg给予0.2%二乙基亚硝胺灌胃,1次/d,5次/周,N组给予等量的生理盐水灌胃,至14周末停药。G2、G3分别在高温环境(36±2)℃、低温环境(0±2)℃中给予热和寒刺激3 h,1次/d,5次/周,共20周。20周末处死动物,观察肝脏大体病变,并留取血清及肝、肺组织标本。3、HE染色,观察大鼠肝脏炎症变化,按Edmondson分级标准进行分级。4、采用全自动生化分析仪检测肝功能,包括丙氨酸氨基转移酶(alanineaminotransferase,ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(aspartate aminotransferase,AST)、白蛋白(albumin,ALB)及γ-谷氨酰基转移酶(γ-Glutamyltranwferase,γ-GT)等。5、应用免疫组化检测肝癌组织中血管内皮生长因子(vascular endothelial growthfactor,VEGF)、增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)和肝细胞癌抗原(Kiel 67 antigen,Ki-67)的表达。6、利用酶联免疫吸附ELISA法检测血清白细胞介素-2(interleukin-2,IL-2)、IL-4、IL-10及干扰素-γ(interferon-γ,IFN-γ)的水平。结果:1、一般情况:造模前各组间大鼠体质量无差别;干预后,各组体质量均显著低于N组(P<0.05);G1、G2、G3间体质量差异无统计学意义(P>0.05)。G1、G2、G3和N组死亡率分别为16.67%(2/12)、33.33%(4/12)、16.67%(2/12)及0%(0/6)。2、肝功能:ALT、AST、ALB、γ-GT测定结果显示,与N组比较,G1、G2、G3组均出现明显异常;G3组肝功能较G1、G2有改善,G2组则较G1组有所加重。3、肿瘤生成相关:肝脏病理切片HE染色显示,G1、G2、G3可见到癌性结节,并伴有肝硬化。经Edmondson分级,G2组病变程度显著重于G1、G3组。免疫组化结果显示,N组见到少量VEGF表达,G1、G2、G3均见于表达显著增强,与G1比较,G2表达增强,G3表达减弱。4、肿瘤增殖相关:免疫组化结果显示,Ki-67、PCNA在N组中见到少量表达,G1、G2、G3均见表达显著增强,与G1比较,G2表达增强,G3表达减弱。5、肿瘤转移相关:处死时,G1、G2、G3均见肿瘤肺转移,G1、G2、G3和N组肺转移率分别为25.0%(3/12)、41.67%(5/12)、16.67%(2/12)及0%(0/6)。6、免疫指标:脾指数显示,与N组比较,各组均存在显著脾肿大;G2>G1>G3,G2和G3间比较差异有统计学意义。ELISA结果显示,G1、G2、G3均存在着不同程度的免疫失衡,与N组比较,IL-2、IFN-γ降低,G2<G1<G3,IL-4及IL-10升高,G2>G1>G3。结论:1、长期(20周)的寒热刺激[(0±2)℃、(36±2)℃]可对大鼠机体造成不同程度的影响。2、长期(0±2)℃寒性刺激对DEN诱发性大鼠肝癌模型肿瘤的生成、转移、增殖呈现一定的抑制作用,而(36±2)℃热刺激则呈现一定程度的促进作用。3、改变大鼠体内T细胞免疫功能及Th1向Th2的漂移,可能是寒热刺激影响DEN诱发性大鼠肝癌肿瘤生物学特性的机制之一。